JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:40 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie ein chemisch fixiertes und gereinigtes Gewebesegment von einem transgenen Mausembryo, der grün fluoreszierendes Protein (GFP) in spinalen Motoneuronen exprimiert.
Montieren Sie das Gewebe vertikal auf eine modifizierte Pipettenspitze.
Befestigen Sie die Spitze an einer Kapillare, die im Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskop befestigt ist.
Platzieren Sie eine mit Puffern gefüllte Probenkammer unter dem Gewebe, um es einzutauchen und Ablagerungen zu entfernen.
Richten Sie das Gewebe mit Hilfe einer Bildgebungssoftware im Strahlengang aus.
Beginnen Sie mit der Bildaufnahme.
Die Lichtquelle sendet eine dünne Schicht Laserlicht aus, die GFPs in einer einzigen Ebene des Gewebes anregt, um Fluoreszenz zu emittieren.
Ein senkrecht zum Strahlengang positionierter Detektor erfasst die emittierte Fluoreszenz.
Erfassen Sie Bilder der spinalen Motoneuronen, um eine 3D-Rekonstruktion der axonalen Verzweigungsmorphologie zu erstellen.
Verwenden Sie Software zur Kartierung von Axonen, zur Identifizierung von Verzweigungsmustern und Endpunkten, um das Wachstum und die Konnektivität von Motoneuronen zu beurteilen.
Richten Sie 5X/0,1 Beleuchtungsoptiken und 5X/0,16 Detektionsoptiken ein. Montieren Sie d
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