JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:34 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit vorfixierten tangentialen Abschnitten der abgeflachten kortikalen Abschnitte des Gehirns. Waschen Sie, um Fixiermittelspuren zu entfernen.
Färben Sie die Schnitte mit einer Lösung aus Diaminobenzidin oder DAB und Nickel-Ammoniumsulfat.
DAB diffundiert in kortikale Neuronen und reagiert in den Mitochondrien mit Cytochromoxidase, wobei ein dunkler Niederschlag entsteht. Nickel-Ammoniumsulfat verdunkelt den Niederschlag und erhöht den Kontrast.
Fügen Sie Paraformaldehyd hinzu, um die Fleckenreaktion zu stoppen, und spülen Sie es dann aus.
Montieren Sie die Abschnitte auf einen Objektträger und trocknen Sie sie mit Ethanol aus.
Spülen Sie mit Isopropanol und Xylol, um den Abschnitt zu reinigen und die Lichtdurchlässigkeit zu verbessern.
Tragen Sie ein Eindeckmedium auf und kleben Sie ein Deckglas darauf.
Wenn es unter einem Hellfeldmikroskop aufgenommen wird, absorbieren und streuen die Ausfällungen in den kortikalen Neuronen Licht, wodurch sie dunkel erscheinen.
Im Gegensatz dazu lassen ungebeizte, freiliegende Flächen Licht durch und wirken hell.
Dieser Kontrast hebt kortikale Module als dunkle, fleckige Strukturen vor einem helleren Hintergrund hervor, die aktive neuron
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