JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:38 Min. • May 29th, 2025
Man nehme Zellen, die aus Ischiasnerven der Maus und Spinalganglien oder DRGs isoliert wurden.
Inkubiere mit Fluorophor-markierten Antikörpern gegen CD45 und CD11b und mit Biotin-markierten Antikörpern gegen MHC Klasse II, um Immunzellen zu markieren.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-markiertem Streptavidin, das an Biotin bindet.
Mit einem Fixiermittel behandeln, um die Zellstruktur zu stabilisieren.
Führen Sie einen Permeabilisierungspuffer mit einer fluoreszierenden DNA-Färbung ein, um die Membranen zu permeabilisieren und die Zellkerne zu markieren.
Führen Sie die Zellen mit einem Durchflusszytometer durch den Laserstrahl, um die optischen und Fluoreszenzeigenschaften zu beurteilen.
Entfernen Sie Aggregate mit einer höheren DNA-Fluoreszenz, um einzelne Zellen zu isolieren und die Fluoreszenz von den Markern zu detektieren.
Identifizieren Sie Zellen, die CD45 exprimieren, einen charakteristischen Marker von Immunzellen, und bestätigen Sie deren Vorhandensein.
Die meisten CD45-positiven Zellen im DRG exprimieren CD11b und MHC Klasse II, was auf mikrogliaähnliche Zellen hinweist, die in den Ischiasnerven fehlen.
Diese Technik ergänzt die Bildgebung zur Analyse der Heterogenität von Immunzelle
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