JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:59 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie einen Membraneinsatz, der transduzierte embryonale organotypische Hirnschnitte der Maus enthält, in denen Neuronen und radiale Gliazellen fluoreszierende Proteine exprimieren, die ihre Visualisierung ermöglichen.
Wählen Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie eine Schicht mit fluoreszierenden kortikalen Neuronen aus, die radial zur Pialoberfläche der Schicht wandern, indem Sie intakte radiale Gliagerüste verwenden.
Übertragen Sie den Membraneinsatz mit der ausgewählten Scheibe in eine Glasbodenschale mit einem Medium, um die Zellaktivität während der Bildgebung zu unterstützen.
Stellen Sie die Schale in die klimatisierte Kammer des inversen Konfokalmikroskops, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten.
Passen Sie die Bildgebungsparameter an, um klare Bilder aufzunehmen und gleichzeitig Lichtschäden zu minimieren.
Konfigurieren Sie als Nächstes einen Z-Stack in der Zielregion, um zelluläre Strukturen zu visualisieren.
Starten Sie die Zeitraffer-Bildgebung in regelmäßigen Abständen.
Analysieren Sie die Bilder, um die radiale Migration der kortikalen Neuronen von der subventrikulären Zone zur kortikalen Platte entlang radialer Gliagerüste zu beurteilen und die neuronalen
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