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Beginnen Sie mit einem Gewebeschnitt aus dem Gehirn einer Maus, der die interessierende Region in einem Puffer enthält, um die Hydratation während der Bildgebung aufrechtzuerhalten.
Das Gewebe wird aus einem Alzheimer-Mausmodell gewonnen, dem der Fluoreszenzfarbstoff Methoxy X04 injiziert wurde.
Methoxy X04 bindet spezifisch an β-gefaltete Blattstrukturen in Amyloid-Plaques und behält seine Fluoreszenz für die Bildgebung und Analyse bei.
Stimulieren Sie das Methoxy-X04 mit einem Fluoreszenzmikroskop mit einem UV-Filter und erfassen Sie die emittierte Fluoreszenz, um fluoreszenzmarkierte Amyloid-Plaques auf dem umgebenden Gewebe sichtbar zu machen.
Ohne den Mikroskoptisch anzupassen, können Sie Bilder derselben Region im Hellfeldmodus aufnehmen, um die Gewebestruktur zu detaillieren, und im Fluoreszenzmodus, um die Plaques zu visualisieren.
Richten Sie die Hellfeld- und Fluoreszenzbilder mit Hilfe einer Bildverarbeitungssoftware aus, um die Plaques präzise auf die anatomischen Strukturen abzubilden.
Diese Bilder bieten eine detaillierte Visualisierung von Amyloid-Plaques in ihrem strukturellen Kontext, um die Pathologie der Alzheimer-Krankheit zu untersuchen.
Mit Hilfe eines stereotaktischen Maushirnatlas wählen Sie Gehirnschnitte aus, die die interessierende Region enthalten, und legen Sie jeden Abschnitt in ein Kryoprotektivum in einer Vertiefung einer 24-Well-Kulturplatte. Verwenden Sie dann eine Einwegpipette, um ein Tröpfchen PBS auf einen Objektträger zu geben, und legen Sie dann den Schnitt auf den Tröpfchen.
Untersuchen Sie den Schnitt unter einem Fluoreszenzmikroskop, um Bereiche zu identifizieren, die Methoxy-X04-markierte A-beta-Plaques enthalten. Ohne den Mikroskoptisch zu bewegen, können Sie Bilder der interessierenden Bereiche sowohl im Hellfeld- als auch im Fluoreszenzmodus aufnehmen. Jedes Bild muss in beiden Feldern die gleiche Region zeigen, um die Plaque mit der strukturellen Region des Gewebeschnitts zu korrelieren.
Speichern und benennen Sie die aufgenommenen Bilder nach der Tiernummer. Notieren Sie auch die Well-Nummer in der Platte und das Feld der aufgenommenen Bilder. Setzen Sie den Schnitt nach Abschluss der Bildgebung wieder in die dafür vorgesehene Vertiefung ein. Untersuchen Sie den nächsten Abschnitt in der Sequenz mit dem gleichen Verfahren, um ein Austrocknen der Abschnitte zu vermeiden.
Um die Bilder auszurichten, öffnen Sie die Hellfeld- und UV-Feldbilder für den gleichen ROI in Bild J. Verwenden Sie dann das Mosaik-J-Plugin, um die Kanten der beiden Bilder auszurichten. Speichern Sie das ausgerichtete und kombinierte Bild entsprechend der Well-Nummer in einem Ordner mit der Nummer des jeweiligen Tieres. Kombinieren Sie die Bilder aus verschiedenen Abschnitten desselben Tieres, um die Plaques in der interessierenden Region zu identifizieren und zu lokalisieren.