Duale Fluoreszenzbildgebung zur Identifizierung differenzierter Oligodendrozyten

Nehmen Sie eine Kultur von Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPCs), die aus dem Gehirn eines Rattenwelpen isoliert wurden und dazu gebracht wurden, sich in Oligodendrozyten zu differenzieren. Die Zellen sind fixiert, um die Zellarchitektur zu erhalten.

Differenzierte Oligodendrozyten exprimieren das Myelin-Basisprotein (MBP), einen Marker für reife Oligodendrozyten, während sowohl OPCs als auch differenzierte Zellen den Oligodendrozyten-Transkriptionsfaktor 2 oder Olig2 exprimieren.

Tragen Sie eine Permeabilisierungs-blockierende Lösung auf und inkubieren Sie unter Rühren, wodurch die Zellmembranen permeabilisiert und unspezifische Bindungsstellen blockiert werden.

Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf die Marker abzielen, und inkubieren Sie unter Rühren, um eine Bindung zu ermöglichen.

Waschen Sie, um ungebundene Antikörper zu entfernen, fügen Sie dann verschiedene Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper hinzu, die für die primären Antikörper spezifisch sind, und inkubieren Sie unter Rühren.

Waschen Sie die Zellen und legen Sie sie dann in ein duales Fluoreszenzbildgebungssystem.

Verwenden Sie Licht bestimmter Wellenlängen, um die unterschiedlichen Fluorophore anzuregen und die