Visualisierung der Mitochondrien innerhalb der intraepidermalen Nervenfasern
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:37 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit einem epidermalen Hautgewebeschnitt, der intraepidermale Nervenfasern oder IENFs enthält, dünne sensorische Neuronenenden.
Die IENFs sind reich an Mitochondrien und liefern Energie für die Signalübertragung von Neuronen.
Das Gewebe hat fluoreszenzmarkierte IENFs, Mitochondrien und epidermale Kerne.
Mit einem inversen konfokalen Mikroskop erfassen Sie sequentiell diskrete Fluoreszenzsignale bei geeigneten Wellenlängen für die Zellkerne, IENFs und Mitochondrien.
Aktivieren Sie einen Live-Scan, um das IENF-Signal zu erfassen, das die Epidermisschicht umfasst.
Führen Sie dann eine sequenzielle Abtastung für jedes Signal durch, um das Übersprechen von Fluoreszenzsignalen zu vermeiden.
Schneiden Sie aus dem kombinierten Bild mit der Software die blau fluoreszierenden Epidermiszellen zu und isolieren
Sie sie.Bearbeiten Sie dann den beschnittenen Bereich, um die Auflösung der grünen IENF-Signale und der roten mitochondrialen Signale zu verbessern.
Generieren Sie als Nächstes ein 3D-Oberflächenbild, um eine Maske für IENFs zu erstellen, und überlagern Sie dann das mitochondriale Oberflächenbild, um nervenspezifische Mitochondrien zu isolieren.
In der endgültigen Ausgabe erschein
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