JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:31 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit einer Bildgebungskammer, die ein immobilisiertes Drosophila-Gehirnexplantat enthält, das in einen Puffer getaucht ist, um die Zellfunktion aufrechtzuerhalten.
Die Neuronen im Gehirn exprimieren zytoplasmatische fluoreszierende Kalziumindikatoren, die an Kalziumionen binden und fluoreszieren.
Stellen Sie die Bildgebungskammer unter ein Fluoreszenzmikroskop, das mit einer Wasserimmersionslinse ausgestattet ist.
Senken Sie das Objektiv und fokussieren Sie sich bei Hellfeldbeleuchtung auf das Gehirn.
Wechseln Sie in den Fluoreszenzmodus und nehmen Sie das Bild auf.
Führen Sie als Nächstes ein Neuropeptid in den Puffer ein und starten Sie die Zeitrafferaufnahme.
Das Neuropeptid bindet an seinen Rezeptor auf Neuronen und löst so die intrazelluläre Signalübertragung aus. Dadurch werden die Kalziumkanäle geöffnet und der Kalziumioneneinstrom ermöglicht.
Diese Kalziumionen binden an die Indikatoren und erhöhen die Fluoreszenzintensität.
Nehmen Sie das Bild nach der Neuropeptid-Stimulation wieder auf.
Vergleichen Sie die Bilder vor und nach der Neuropeptid-Stimulation.
Eine Erhöhung der Fluoreszenzintensität nach Neuropeptidstimulation spiegelt die Reaktion des Drosophila-Gehirns auf
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