JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:25 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie einen getrimmten, in Harz eingebetteten Gewebeschnitt aus dem Maushirn, der den Hippocampus enthält.
Der Schnitt wird mit Schwermetallen gefärbt, um den Kontrast unter einem Elektronenmikroskop zu verbessern.
Montieren Sie den Abschnitt mit Cyanacrylatkleber auf einen Aluminiumstift.
Beschichten Sie die Blockseiten mit kolloidaler Silberpaste, um einen leitenden Weg zum Aluminiumstift zu schaffen.
Untersuchen Sie den Gewebeblock mit einem seriellen Blockflächen-Rasterelektronenmikroskop (SBFSEM).
Innerhalb des SBFSEM schneidet das Ultramikrotom den Block nacheinander in ultradünne Schichten, während ein Niederspannungs-Elektronenstrahl die freiliegende Oberfläche abtastet.
Ein Rückstreuelektronendetektor nimmt hochauflösende 2D-Bilder auf, die Mitochondrien und umgebende zelluläre Strukturen sichtbar machen.
Passen Sie mit geeigneter Software die Helligkeit und den Kontrast an, um die Bildschärfe zu verbessern.
Richten Sie die sequenziellen Bilder aus, um ein 3D-Volumen des Hirngewebes zu rekonstruieren. Diese 3D-Rekonstruktion ermöglicht eine präzise Kartierung der mitochondrialen Morphologie, der räumlichen Verteilung und ihrer Beziehungen innerhalb der neuronalen Komparti
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