Identifizierung von Subtypen von retinalen Ganglienzellen der Maus durch Fluoreszenzverfolgung

Platzieren Sie ein Netzhautgewebe, das von einer transgenen Maus mit fluoreszenzmarkierten retinalen Ganglienzellen (RGCs) isoliert wurde, in einer Aufnahmekammer.

Visuelle Informationen werden an die RGCs weitergeleitet, die von ihren Axonen über den Sehnerv an das Gehirn weitergeleitet werden.

RGC-Subtypen unterscheiden sich durch die Verzweigungsmuster ihrer Dendriten, die sich innerhalb der inneren Netzhautschicht in Unterschichten schichten.

Glätten Sie das Netzhautgewebe und befestigen Sie es mit einem Gewebeanker.

Übertragen Sie die Kammer auf einen Mikroskoptisch und perfundieren Sie eine sauerstoffhaltige Lösung, um die Lebensfähigkeit des RGC zu erhalten.

Identifizieren Sie mit Infrarotbeleuchtung die fluoreszierenden RGCs.

Positionieren Sie eine Pipette mit einem fluoreszierenden Tracer auf einem RGC

und

üben Sie Überdruck aus, um ein Verstopfen zu vermeiden.

Schalten Sie auf Unterdruck um und ziehen Sie die Membran in die Pipette, um eine Versiegelung zu bilden.

Wenden Sie einen Sog an, um die Membran zu brechen, und stellen Sie eine Ganzzellkonfiguration her, die die Tracerdiffusion in die Dendriten erleichtert.

Beobachten Sie die dendritische Morphologie und Schichtung, um d