JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:33 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit einer Perfusionsanordnung, die auf dem Tisch eines inversen Mikroskops platziert wird.
Die Perfusionsanordnung enthält einen präparierten peripheren Nerv, der zwischen einem Deckglas und einem Mikroaquädukt-Objektträger mit kontinuierlicher Kochsalzperfusion gesichert ist.
Die myelinisierten Axone des Nervs exprimieren die grünen, mit Fluorophoren markierten Neurofilamente.
Fokussieren Sie sich mit Hellfeldbeleuchtung auf die myelinisierten Axone.
Wechseln Sie in den konfokalen Modus, bleichen Sie mit hoher Laserleistung und nehmen Sie dann ein Referenzbild mit geringer Autofluoreszenz und geringer Laserleistung auf.
Zeichnen Sie parallele Linien entlang des Axons, um die Länge des Photoaktivierungsfensters zu definieren. Verwenden Sie dies als Richtlinie, um einen rechteckigen Aktivierungsbereich zu erstellen.
Beleuchten Sie diesen Bereich mit einer bestimmten Wellenlänge, um die mit grünen Fluorophoren markierten Neurofilamente zu aktivieren und sie zum Fluoreszieren zu bringen. Erfassen Sie das Bild.
Nehmen Sie nach der Aktivierung Zeitrafferbilder auf.
Im Laufe der Zeit bewegen sich die fluoreszierenden Neurofilamente in beide Richtungen und breiten sich in benachbarte
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