JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:52 Min. • May 29th, 2025
Beginnen Sie mit der Einrichtung des Anregungslichts für das Zwei-Photonen-Mikroskop.
Nehmen Sie einen anästhesierten transgenen Mauswelpen mit einem kreisförmigen Glasfenster und einer in den Schädel implantierten Kopfplatte.
Die Neuronen exprimieren rot fluoreszierende Proteine, um die Bildgebung zu erleichtern.
Reinigen Sie das Glas-Imaging-Fenster und befestigen Sie den Welpen auf dem Zwei-Photonen-Imaging-Tisch.
Richten Sie das Bildfenster mit dem Mikroskopobjektiv aus, indem Sie den Kopf des Welpen anpassen.
Verwende ein Heizkissen, um die Körpertemperatur des Welpen zu halten.
Passen Sie die Anästhesieflussrate an.
Tragen Sie einen Tropfen Wasser auf das Deckglas auf und senken Sie dann die Objektivlinse des Mikroskops.
Bei der Zwei-Photonen-Mikroskopie werden zwei Photonen des Lichts verwendet, um fluoreszierende Proteine zu aktivieren, was eine detaillierte neuronale Bildgebung mit minimalem Hintergrundrauschen und Photobleichen ermöglicht.
Nehmen Sie Bilder der Neuronen in verschiedenen Tiefen auf, um ihre Struktur zu visualisieren
Stapeln Sie schließlich die Bilder, um eine dreidimensionale Darstellung des Neurons zu erstellen, einschließlich seiner neuronalen Projektionen, um wac
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