JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:54 Min. • May 29th, 2025
Befestigen Sie eine immobilisierte transgene Drosophila mit ihrem Kopf in einer Aufnahmekammer auf einem Fluoreszenzmikroskoptisch.
Der Pilzkörper der Fliege besteht aus Neuronen, die das kalziumempfindliche biolumineszierende Fusionsprotein exprimieren, das durch einen vorgeladenen Cofaktor aktiviert wird.
Schließen Sie einen Perfusionsschlauch an die Kammer an. Lokalisiere die fluoreszierenden Pilzkörper und konzentriere dich dabei auf den Kelch und die medialen Lappen. Bestätigen Sie die Drainage mit einem Puffer.
Stellen Sie die Bildgebungsparameter ein und fokussieren Sie sich auf den Kelch- und Mediallappen. Nehmen Sie im Dunkeln Basis-Fluoreszenzbilder der Pilzkörper auf, bevor Sie dem Stimulanzien ausgesetzt werden.
Perfundieren Sie Nikotin in einem kalziumhaltigen Puffer, um nikotinische Acetylcholinrezeptoren zu aktivieren, wodurch der Kalziumeinstrom und die biolumineszierende Lichtemission ausgelöst werden.
Mit Puffer waschen, um die Ausgangsbedingungen wiederherzustellen.
Kaliumchlorid perfundieren, um Neuronen zu depolarisieren, wodurch die intrazelluläre Kalziumfreisetzung und die biolumineszierende Signalemission ausgelöst werden.
Mit Puffer waschen, um die Ausgangsbedi
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos