Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung der PolyQ-Proteinaggregation in Caenorhabditis elegans-Neuronen

Beginnen Sie mit anästhesierten, altersangepassten Kontroll- und Chaperon-defizienten Caenorhabditis elegans-Würmern.

Beide Gruppen exprimieren Fluorophor-markierte polyQ-Proteine in ihren Neuronen, die anfällig für Fehlfaltung sind.

Bei Kontrollwürmern begrenzen Chaperon-Proteine die fehlgefaltete polyQ-Aggregation, während bei Chaperon-defizienten Würmern fehlgefaltete polyQ-Proteine leicht Aggregate bilden.

Platzieren Sie den Objektträger auf einem konfokalen Mikroskoptisch für die Fluoreszenzlebensdauer-Bildgebungsmikroskopie (FLIM).

Beleuchten Sie die Würmer mit einem gepulsten Laser.

Der Laser regt das Fluorophor an, das ein Photon emittiert, wenn es in den Grundzustand zurückkehrt.

FLIM misst die Fluoreszenzlebensdauer – die Dauer, die das Fluorophor in seinem angeregten Zustand verbleibt.

In Chaperon-defizienten Würmern gruppiert die polyQ-Aggregation Fluorophore und fördert so den Energietransfer zwischen benachbarten Fluorophoren anstelle der Photonenemission, wodurch die Lebensdauer der Fluoreszenz verkürzt wird.

Die FLIM-Software verarbeitet diese Lebensdauern, um farbcodierte Karten zu erzeugen, die eine Aggregationsvisualisierung ermöglichen.

Eine im Vergleich zu Kontro