JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:59 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer Kleinhirnschnitte, die aus dem Gehirn eines postnatalen Rattenwelpen in einer Multi-Well-Platte mit Medium gewonnen wurde.
Entfernen Sie das Medium und inkubieren Sie die Scheibe in einer zytoplasmatischen Fluoreszenzfarbstofflösung, um die Körnerzellen (GCs) zu markieren.
Übertragen Sie die Scheibe auf eine Transwell-Einlegemembran und entfernen Sie überschüssige Farbstoffe.
Entfernen Sie den Einsatz und füllen Sie die Vertiefung mit Medien. Setzen Sie dann den Einsatz wieder ein und fügen Sie Medien hinzu, um das Gewebe zu bedecken.
Inkubieren, damit sich das Gewebe an der Einführmembran festsetzen kann.
Übertragen Sie die Platte in einen Inkubator, der an einem konfokalen Makroskop befestigt ist, und legen Sie eine Glasabdeckung über die Platte.
Legen Sie die Kulturbedingungen fest, inkubieren Sie das Gewebe weiter und beginnen Sie dann mit der Bildgebung.
Bei Laserbeleuchtung fluoreszieren die markierten GCs.
Nehmen Sie Zeitrafferbilder auf, um die radiale Wanderung der GCs durch die molekulare Schicht des Kleinhirns zu visualisieren.
Analysieren Sie mit Hilfe einer Bildgebungssoftware die Migrationsdistanz der GCs.
Nachdem Sie die Probe geschnitten haben, verwend
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