JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:43 Min. • June 18th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit adhärenten neuralen Stammzellen oder NSCs, die aus einem transgenen Mäusegehirn isoliert wurden. Diese NSCs enthalten ein fluoreszenzmarkiertes Protein, das spezifisch für die erste Wachstumsphase oder G1 ist.
Wenn sich der NSC teilt, fluoresziert er in der G1-Phase des Zellzyklus, während er in anderen Phasen keine Fluoreszenz emittiert.
Legen Sie die Platte in eine konfokale Bildgebungskammer des Laser-Scanning-Mikroskops, die auf einer kontrollierten Temperatur gehalten wird.
Wählen Sie die gewünschte Objektivlinse aus und stellen Sie die Fluoreszenzintensität ein.
Konfigurieren Sie die Parameter für das Zeitraffer-Imaging.
Wählen Sie die Option "Großes Bild" und planen Sie die Bildaufnahme in regelmäßigen Abständen für die gewünschte Dauer.
Verwenden Sie einen Hochgeschwindigkeits-Resonanzscanner, um Photobleaching zu vermeiden und eine hohe Auflösung zu erhalten.
Verwenden Sie die Hellfeldeinstellung, um die Zellform zu visualisieren, und verwenden Sie einen geeigneten Fluoreszenzfilter, um die Fluoreszenz zu erfassen.
Starten Sie die Zeitraffer-Bildgebung des NSC, um verschiedene Zellzyklusphasen zu visualisieren.
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