Juxtazelluläre Aufzeichnung und Färbung zur präzisen Kartierung der neuronalen Aktivität bei einer wachen Ratte

0 views • 2:54 min • June 18th, 2025

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Beginnen Sie mit einer gefesselten, wachen Ratte in einer experimentellen Vorrichtung, deren Kopf fest an Ort und Stelle ist.

Öffnen Sie die zuvor implantierte Aufnahmekammer und entfernen Sie die Silikongelabdeckung.

Entfernen Sie nachgewachsenes Gewebe, um Zugang zum Gehirn zu erhalten.

Fügen Sie einen Tropfen Kochsalzlösung hinzu, um die Hydratation aufrechtzuerhalten.

Befestigen Sie als Nächstes eine vorgefüllte Aufnahmepipette mit Chicagoblau-Farbstoff an einem Mikromanipulator.

Senken Sie die Pipette in die Aufnahmekammer ab, bis sie die Zielregion des Gehirns erreicht.

Die Pipette nimmt Kontakt mit dem Neuron auf und zeichnet die Signale des Neurons auf, ohne es zu durchdringen.

Hören Sie auf diese neuronalen Signale als hörbares Klicken und geben Sie dann elektrische Impulse über die Pipette ab.

Diese Impulse injizieren den Farbstoff neben dem Neuron und ermöglichen so eine präzise Färbung der Zielhirnregion.

Diese juxtazellulären Aufzeichnungs- und Färbetechniken visualisieren die Aufnahmestelle präzise und ermöglichen eine genaue Zuordnung der neuronalen Aktivität zur Gehirnanatomie.

Setzen Sie die Ratte in die Stoffsocke und setzen Sie die Stoffsocke in ein starres Rohr auf einer geeigneten Versuchsvorrichtung um. Befestigen Sie die Kopfhalteplatte an der Ratte an dem entsprechenden Stück an der Vorrichtung. Platzieren Sie als Nächstes eine 832er Mutter auf der Kopfhalteschraube, die an der Ratte implantiert ist.

Anschließend schrauben Sie eine Gewindestange aus Edelstahl in die Kopfschraube. Öffnen Sie danach die Aufnahmekammer und entfernen Sie das Silikongel. Reinigen Sie die Kraniotomie mit einer feinen Pinzette, wenn in der Kraniotomie Gewebe nachgewachsen ist. Verwenden Sie während dieses Vorgangs bei Bedarf eine Isofluran-Anästhesie.

Befestigen Sie anschließend die Pipette an dem motorisierten Mikromanipulator. Bewegen Sie die Pipette an die gewünschte Aufnahmeposition in der vorderen, hinteren und medialen Seitenachse. Schieben Sie dann die Pipette ventral durch die Dura, bis sie sich etwa 500 Mikrometer dorsal zum vorgesehenen Aufnahmeort befindet. Schieben Sie die Pipette langsam vor, während Sie auf einem Audiomonitor auf Spike-Ereignisse der aufgezeichneten verstärkten Spannung achten. Sobald Spike-Ereignisse identifiziert wurden, bewegen Sie die Pipette weiter um etwa 0 bis 100 Mikrometer, bis die positiven Spannungsablenkungen größer als etwa 500 Mikrovolt sind.

Um den Aufnahmeort zu beschriften, stellen Sie die Stromquelle auf minus 4 Mikroampere mit zwei Sekundenimpulsen bei 50 % Tastverhältnis ein. Und leiten Sie den Strom vier Minuten lang durch die Pipette, um iontophoretisches Chicago Sky Blue zu injizieren.

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Akut In vivo Elektrophysiologische Aufzeichnungen von lokalen Feldpotentialen und Multi-Unit-Aktivitäten von der Hyperdirect-Pathway in anästhesierten Ratten

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Last updated: 18 July 2026