JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:06 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit anästhesierten transgenen Zebrafischlarven in einer Auffangkammer mit einem sauerstoffhaltigen physiologischen Puffer unter einem Stereomikroskop.
Das Kleinhirn im Gehirn enthält genetisch veränderte Purkinje-Neuronen, die fluoreszierende zytoplasmatische Proteine exprimieren.
Entfernen Sie überschüssiges Medium und fügen Sie dann geschmolzene Agarose hinzu, um die Larven für eine stabile Bildgebung zu immobilisieren.
Richten Sie die Larven mit der Rückenseite nach oben aus, um das Kleinhirn sichtbar zu machen.
Nach dem Erstarren überschüssige Agarose abschneiden. Schneiden Sie mit einer Glasnadel die pigmentierte Haut über dem Gehirn heraus, um sie freizulegen.
Drehen Sie den Agaroseblock auf eine Bildgebungskammer mit geschmolzener Agarose, um ihn unter einem inversen Mikroskop abzubilden.
Fügen Sie den physiologischen Puffer hinzu, um die neuronale Funktion zu erhalten.
Positionieren Sie die Kammer unter einem inversen Konfokalmikroskop. Wenden Sie Anregungslicht an, um die fluoreszierenden Proteine anzuregen und so die markierten Neuronen sichtbar zu machen.
Wenn die pigmentierten Hautzellen nicht entfernt werden, streuen und absorbieren sie das Anregungslicht, wodurch
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