JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:15 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einem lebenden postnatalen Maus-Netzhautexplantat, das auf einem Membranfilter montiert und in einer Inkubationskammer unter einem konfokalen Mikroskop platziert wird.
Die Netzhaut wird transfiziert, um ein fluoreszierendes Protein in den Membranen von Starburst-Amakrin-Interneuronen zu exprimieren.
Legen Sie ein vorbenetztes Probengewicht auf die Netzhaut, um sie zu stabilisieren.
Füllen Sie die Kammer mit Puffer.
Halten Sie einen optimalen Pufferfluss und eine optimale Temperatur in der Kammer aufrecht, um die neuronale Lebensfähigkeit zu erhalten.
Positionieren Sie ein Wasserimmersionsobjektiv in der Bildgebungskammer.
Starten Sie die Epifluoreszenzbildgebung.
Das Laserlicht, das durch das Objektiv geleitet wird, regt das fluoreszierende Protein in den Amakrinzellen an.
Die emittierte Fluoreszenz wird durch dasselbe Objektiv erfasst, was eine Visualisierung der markierten Amakrinzellen ermöglicht.
Identifizieren Sie eine hell fluoreszierende Zelle für die Bildgebung.
Stellen Sie die Bildgebungsparameter ein.
Nehmen Sie Bilder in mehreren Z-Ebenen auf, um eine 3D-Visualisierung der vollständigen dendritischen Morphologie zu erhalten.
Führen Sie Zeitraffer-Bildgebung durch, u
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