Stereotaktische Mikroinjektion eines viralen Vektors zur Genmanipulation in einem Striatum eines Maus-Jungtiers
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:15 Min. • August 7th, 2025
Nehmen wir einen genetisch veränderten Mauswelpen, der eine loxP-flankierte STOP-Kassette trägt, die die Expression von rot fluoreszierendem Protein oder RFP blockiert.
Befestigen Sie den Welpen auf einem speziell angefertigten stereotaktischen Rahmen und bedecken Sie ihn mit Eis, um die Narkose aufrechtzuerhalten.
Desinfizieren Sie die Kopfhaut und markieren Sie Lambda als Referenzpunkt.
Richten Sie die Injektionsnadel auf die striatalen Koordinaten relativ zum Lambda aus und punktieren Sie den Schädel.
Ziehen Sie die Nadel auf die Schädeloberfläche zurück und führen Sie sie dann in die Zieltiefe ein.
Injizieren Sie den mit Farbstoff gemischten viralen Vektor mit einer kontrollierten Geschwindigkeit in das Striatum. Der Vektor kodiert für grün fluoreszierende Proteine oder GFPs und Cre-Rekombinase.
Ziehen Sie die Nadel langsam zurück, um einen Rückfluss der Lösung zu verhindern.
Entfernen Sie den Welpen und lassen Sie ihn erholen.
In striatalen Zellen gibt das Virus sein Genom frei, was die Expression von Cre-Rekombinase und GFP ermöglicht. Cre schneidet die loxP-flankierte STOP-Kassette aus und aktiviert die RFP-Expression.
Die gleichzeitige Expression von GFP und RFP bestätigt die erfolg
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