Implantation eines Rückenmarksfensters in einer Maus für die In-vivo-Bildgebung

Beginnen Sie mit einer anästhesierten Maus mit einem operativ freiliegenden Rückenmark.

Platzieren Sie ein Deckglas aus Borosilikatglas über dem Rückenmark, um ein optisches Fenster für die Bildgebung zu schaffen.

Tragen Sie warme Agarose auf die Ränder des Deckglases auf und lassen Sie sie durch Kapillarwirkung nach unten ziehen, um die Hydratation des Gewebes aufrechtzuerhalten.

Führen Sie Gewebekleber in die intakten knöchernen Strukturen ein, die die Stelle umgeben, um das Rückenmarksfenster zu stabilisieren.

Tragen Sie Zahnzement mit einem Beschleuniger auf die Klebeschicht auf und positionieren Sie dann eine 3D-gedruckte Rückplatte über dem Deckglas, bevor der Zement aushärtet.

Tragen Sie zusätzliche dünne Zementschichten auf, um die Haftung der Rückplatte zu verstärken.

Nachdem der Zement getrocknet ist, befestigen Sie die Rückplatte an einem gegabelten Rückplattenhalter, um Bewegungsartefakte durch Atmung und Herzschlag zu minimieren.

Fügen Sie Kochsalzlösung hinzu, um auf Undichtigkeiten zu prüfen, und versiegeln Sie sie bei Bedarf mit zusätzlichem Zement.

Übertragen Sie schließlich die Maus und die Plattform zur Bildgebung in ein Zwei-Photonen-Mikroskop.

Für die Implantation von Deckglas tragen Sie vorsichtig ein 3 Millimeter großes Borosilikat-Deckglas auf die freiliegende Nabelschnur auf. Tragen Sie mit einem kleinen Spachtel 39 Grad Celsius auf, erwärmen Sie 2 % Agarose bis zum Rand des Glases und lassen Sie die Agarose durch Kapillarwirkung unter die Deckglasoberfläche ziehen. Gewebekleber auf die freiliegenden knöchernen Gelenkfortsätze des intakten Nachbarwirbels auf Brusthöhe der Wirbelsäulen 11 und 13 auftragen.

Tragen Sie zusätzlichen Gewebekleber in einem Ring um die Laminektomiestelle, über die angrenzende Sehne und den Querfortsatz auf. Tragen Sie anschließend mit einem neuen Spachtel Zahnzement, gemischt mit Beschleuniger, auf die Gewebeklebeschicht auf und platzieren Sie eine Rückplatte auf dem Operationsfeld, die mittig über dem Deckglasfenster liegt.

Das Auftragen mehrerer dünner Schichten Zahnzement führt zu einer stärkeren Haftung der Zahnplatte, aber achten Sie darauf, die Rückenplatte schnell zu platzieren, bevor der Zahnzement zu trocknen beginnt.

Nachdem Sie den Zahnzement 10 Minuten aushärten gelassen haben, füllen Sie den inneren Boden und die Unterseite der Rückplatte mit zusätzlichem Klebstoff aus

Das Auftragen des Zahnzementes in dünnen Schichten kann dazu beitragen, das Risiko zu verringern, dass sich Zement auf das Deckglas und die Agarose ausbreitet, was das gesamte Protokoll beeinträchtigen kann.

Wenn der Zahnzement getrocknet ist, bringen Sie einen gegabelten Plattenhalter an der entsprechenden Stelle über dem Fenster an und schrauben Sie die Rückenplatte in den Plattenhalter. Tragen Sie dann Kochsalzlösung auf die Rückplatte auf, um sie auf Dichtheit zu prüfen. Das Tier und die Operationsplattform können dann auf den optischen Tisch eines Zwei-Photonen-Mikroskops übertragen werden, um durch das Deckglasfenster abzubilden.