JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:00 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer Schale, die kortikale Hirnschnitte von transgenen Mausembryonen in Medien enthält, die mit Luciferin ergänzt sind.
Die kortikale Region enthält neurale Stammzellen, die grün fluoreszierende Proteine oder GFPs exprimieren, und ein interessierendes Gen, das mit einem Luciferase-Reportergen fusioniert ist.
Stellen Sie die Schüssel für Fluoreszenz- und Leuchtdichtemessungen auf den Mikroskoptisch.
Nehmen Sie Testbilder der GFP-Fluoreszenz auf, wobei Sie sich auf die interessierenden Regionen konzentrieren.
Während der neuronalen Differenzierung beginnen Stammzellen, das interessierende Gen zu exprimieren und fusionierte Proteine mit dem Luciferase-Enzym zu produzieren.
Das Luciferin interagiert mit Luciferase-Enzymen und erzeugt eine Biolumineszenz, die die Expression des interessierenden Gens während der Differenzierung direkt widerspiegelt.
Nehmen Sie ein Fluoreszenzbild auf, um bestimmte Aktivitätsbereiche zu identifizieren, ein Biolumineszenzbild zur Überwachung der dynamischen Genexpression und ein Hellfeldbild, um morphologische Informationen zu liefern.
Erfassen Sie diese dreidimensionalen Zeitrafferbilder, um die Genexpression während der neuronalen Differenzier
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