JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 4:17 Min. • August 7th, 2025
Sichern Sie eine anästhesierte Maus in einem stereotaktischen Rahmen.
Desinfizieren Sie die rasierte Kopfhaut und machen Sie dann einen Schnitt in der Mittellinie, um den Schädel freizulegen.
Trocknen Sie den Schädel und tragen Sie Wasserstoffperoxid auf, um die Sichtbarkeit des Bregmas zu verbessern.
Suchen Sie bregma und lambda und identifizieren Sie dann die Ziel-Sites.
Bohren Sie vorsichtig durch den Schädel an den Zielstellen.
Befestigen Sie die mit Viren gefüllte Spritze an dem stereotaktischen Instrument.
Das Virus kodiert Cas9 und eine Single-Guide-RNA für die Genomeditierung in Neuronen des Gyrus dentatus sowie einen fluoreszierenden Reporter zur Markierung infizierter Neuronen.
Senken Sie die Spritze ab, um den Gyrus dentatus zu erreichen, und injizieren Sie das Virus dann langsam, um eine gleichmäßige Verteilung zu gewährleisten.
Heben Sie die Spritze allmählich an und wiederholen Sie die Injektion an zusätzlichen Koordinaten.
Halten Sie kurz inne, um einen Rückfluss zu verhindern, und ziehen Sie die Nadel dann langsam zurück.
Wiederholen Sie den Vorgang auf der gegenüberliegenden Hemisphäre.
Zum Schluss nähen Sie den Schnitt.
Das Modell ist nun bereit für weitere Studien.
Rasieren Sie den Kopf einer anästhesierten Maus, um sich auf die Injektionsstelle vorzubereiten. Leiten Sie 4% Isofluran in den Nasenkonus. Platzieren Sie als Nächstes die Maus in dem stereotaktischen Instrument. Führen Sie die Beißstange in den Mund ein, bis die Zähne in den Schlitz fallen, bevor Sie die Ohrstangen befestigen.
Stellen Sie sicher, dass sich der Körper des Tieres auf dem Heizkissen befindet und sich die Nase im Nasenkegel befindet. Bestätigen Sie anschließend die Anästhesie, indem Sie den Fuß kneifen. Tragen Sie dann künstliche Tränen auf, um die Augen zu befeuchten. Tupfen Sie anschließend den rasierten Kopf mit Povidon, Jod und Lidocain ab.
Machen Sie nun einen kleinen Schnitt entlang der Mittellinie der Kopfhaut. Trocknen Sie den Schädel mit einem Tupfer ab und tragen Sie Wasserstoffperoxid auf, um das Bregma sichtbar zu machen. Lokalisieren Sie mit einem Präparierfernrohr das Bregma auf dem Schädel und platzieren Sie den Bohrer darüber. Legen Sie die digitalen stereotaktischen Koordinaten der X-, Y- und Z-Ebenen auf 0 fest.
Um sicherzustellen, dass der Kopf auf der rostralen kaudalen y-Achse nivelliert ist, platzieren Sie den Bohrer auf Lambda und richten Sie den Kopf so aus, dass die z-Koordinate bei Bregma und Lambda ungefähr gleich 0 ist. Um sicherzustellen, dass der Kopf entlang der x-Achse nivelliert ist, platzieren Sie den Bohrer auf dem Mittelpunkt zwischen Bregma und Lambda und messen Sie die z-Koordinaten in 1 Millimeter Abstand zum Mittelpunkt auf beiden Seiten, um sicherzustellen, dass sie gleich sind.
Senken Sie dann den Isofluran auf 2%, bevor Sie den Bohrer über die gewünschten Koordinaten platzieren, und bohren Sie vorsichtig durch den Schädel. Nachdem Sie alle Löcher gebohrt haben, kleben Sie die mit Viren gefüllte Spritze auf das stereotaktische Instrument. Zentrieren Sie die Spritze über dem Loch und setzen Sie die z-Koordinate am Schädel auf 0. Senken Sie die Spritze langsam auf die tiefste Z-Tiefe ab und beginnen Sie die Injektion mit einer Geschwindigkeit von 0,25 Mikrolitern pro Minute mit einem stereotaktischen Injektor.
Nachdem die Injektion in der tiefsten Z-Tiefe abgeschlossen ist, warten Sie eine Minute, bevor Sie sie auf die nächste Koordinate anheben, und beginnen Sie erneut mit der Injektion. Setzen Sie dieses Muster fort, bis alle Z-Injektionskoordinaten injiziert sind. Warten Sie nach der letzten Injektion zwei Minuten, bevor Sie die Spritze entfernen. Entfernen Sie dann die Maus aus dem stereotaktischen Instrument und nähen Sie die Kopfhaut. Tragen Sie Lidocain und antibakterielle Creme auf die Operationsstelle auf und verabreichen Sie Schmerzmittel, bevor Sie das Tier in eine beheizte Aufwachkammer bringen.