Echtzeit-In-vitro-Bildgebung der axonalen Verzweigung in kortikalen Neuronen der Maus

Nehmen Sie eine Bildgebungsschale mit Glasboden, die embryonale kortikale Neuronen der Maus enthält.

Platzieren Sie die Schale in der Klimakammer eines DIC-Mikroskops, um die Lebensfähigkeit der Zellen während der Bildgebung zu erhalten.

Die DIC-Mikroskopie teilt polarisiertes Licht in zwei Strahlen auf, die die Probe durchqueren.

Schwankungen des Brechungsindex über die Probe führen zu Phasenverschiebungen zwischen diesen Strahlen.

Wenn die Strahlen rekombinieren, erzeugen ihre Interferenzen ein kontrastreiches Bild, das feinere Zellstrukturen sichtbar macht.

Identifizieren Sie Neuronen mit unverzweigten Axonen und verwenden Sie Zeitraffer-Bildgebung, um axonale Verzweigungen zu visualisieren.

Behandeln Sie mit Netrin-1, einem extrazellulären Leitsignal, der an axonale Rezeptoren bindet und eine lokalisierte Exozytose auslöst.

Exozytäre Vesikel liefern Membrankomponenten an die Stellen, während das Zytoskelett reorganisiert wird, um die Membranexpansion zu unterstützen.

Unter dem Mikroskop erscheinen diese Veränderungen als kleine Vorsprünge, die den Beginn der axonalen Verzweigung markieren.

Im Laufe der Zeit entwickeln sich diese Vorsprünge zu reifen axonalen Ästen, die den dynamischen P