Intrathekale Verabreichung einer Testsubstanz an das Zentralnervensystem der Ratte

Beginnen Sie mit einer narkotisierten Ratte mit einer implantierten Führungskanüle im lumbalen Spinalkanal.

Führen Sie eine Katheterdrahtverbindung durch die Führungskanüle in einem Winkel in den intrathekalen Raum ein, in dem die Zerebrospinalflüssigkeit oder der Liquor zirkuliert.

Entfernen Sie die Führungskanüle und schieben Sie den Katheter langsam tiefer vor.

Entfernen Sie dann den Draht vollständig und schließen Sie den Katheter an ein Einführsystem an.

Injizieren Sie sterile Kochsalzlösung in den Wirbelkanal und sorgen Sie so für einen freien Durchgang.

Verabreichen Sie langsam eine Testlösung in den Liquor, gefolgt von einer Spülung mit steriler Kochsalzlösung.

Nehmen Sie das Einführsystem ab, schneiden Sie den Katheter ab und versiegeln Sie sein Ende.

Nähen Sie den heißversiegelten Katheter mit dem Bindegewebe und schließen Sie dann die Haut über dem Katheter. Reinigen Sie die Stelle und lassen Sie die Ratte sich erholen.

Die Testverbindung breitet sich über den Liquor in das Rückenmark und das Gehirn aus, die das Zentralnervensystem oder ZNS bilden.

Im ZNS dringt es in die Neuronen ein und bietet therapeutisches Potenzial.

Identifizieren Sie für die Platzierung des Katheters und die Injektion der Verbindung die beiden natürlichen Gruben zwischen den Muskeln über dem rasierten Becken. Und während Sie mit einer Hand die Achselhöhlen halten, drücken und fühlen Sie mit der anderen Hand sanft von kaudaler zu rostraler Richtung, um die erste große Vertiefung zwischen den Wirbeln zu lokalisieren. Nachdem Sie den Zwischenwirbelraum zwischen den Wirbeln S1 und L6 identifiziert haben, bewegen Sie sich leicht rostral, um den Zwischenwirbelraum zwischen den Wirbeln L5 und L6 zu identifizieren.

Verwenden Sie ein Skalpell, um an dieser Stelle einen nicht mehr als 2 Zentimeter langen Schnitt in die Haut- und Muskelkapsel zu machen, entlang der Mittellinie von der rostralen zur kaudalen Richtung, so dass sich die Injektionsstelle in der Mitte des Schnitts befindet. Mit einer Präparierschere das Bindegewebe wegpräparieren, bis die Muskelschicht sichtbar ist. Machen Sie einen 1 Zentimeter langen Schnitt in der Muskelkapsel, unmittelbar lateral des dorsalen Wirbelfortsatzes der L6 Lendenwirbel

Positionieren Sie die Führungskanülennadelanordnung in der Nähe der vorderen Seite des sechsten Lendenwirbels und schieben Sie die Anordnung in den Zwischenwirbelraum entlang der vorderen Seite des sechsten Wirbels, so dass das Ende der Nadel in den Spinalkanal eindringt.

Verwenden Sie eine stumpfe Pinzette, um die dorsalen Wirbelfortsätze des L6-Lendenwirbels zu lokalisieren. Schieben Sie dann die Nadel entlang der vorderen Seite des sechsten Wirbels in den Zwischenwirbelraum.

Schieben Sie die Führungskanüle entlang der Nadel in Position. Entfernen Sie die Nadel und führen Sie den Katheterdraht in die Führungskanüle ein. Winkeln Sie den Katheter in einem Winkel von etwa 45 Grad zum Wirbelkanal an und drücken Sie das Ende des Katheters etwa 0,3 Zentimeter in den Kanal.

Entfernen Sie den Mandarindraht etwa 2,5 Zentimeter von der intrathekalen Spitze des Katheters entfernt und schieben Sie den Katheter in den Spinalkanal vor, bis die 2-Zentimeter-Markierung auf dem Katheter knapp unterhalb des Muskels sichtbar ist. Wenn der Katheter an Ort und Stelle ist, entfernen Sie die Führungskanüle, um den Katheter und den Mandarindraht an Ort und Stelle zu belassen.

Schieben Sie den Katheter in den Spinalkanal vor, bis sich die 2-Zentimeter-Markierung am Eingang des Kanals befindet, und ziehen Sie den Mandrindraht vollständig zurück. Liquor cerebrospinalis kann sichtbar gemacht werden, wenn er in den implantierten Katheter eintritt. Verbinden Sie dann die Einführkatheterbaugruppe über das 30-Gauge-Nadelende mit dem distalen Ende des implantierten Katheters.

Laden Sie anschließend 60 Mikroliter sterile Kochsalzlösung in eine 100-Mikroliter-Spritze und laden Sie einen Bolus von 30 Mikrolitern der Testverbindung in eine zweite Spritze. Verbinden Sie die Kochsalzspritze mit dem Schlauchadapterende der Einführkatheterbaugruppe und spülen Sie 20 Mikroliter sterile Kochsalzlösung in den intrathekalen Raum.

Wenn die gesamte Kochsalzlösung gespült wurde, ersetzen Sie die Kochsalzspritze durch die mit Bolus beladene Spritze und injizieren Sie 30 Mikroliter der Testverbindung über einen Zeitraum von 30 Sekunden in den intrathekalen Raum. Wenn der gesamte Bolus abgegeben wurde, ersetzen Sie die mit Bolus beladene Spritze durch eine andere mit Kochsalzlösung beladene Spritze und spülen Sie den Katheter mit zusätzlichen 40 Mikrolitern Kochsalzlösung.

Wenn das zweite Volumen Kochsalzlösung abgegeben wurde, lösen Sie die Einführkatheterbaugruppe vom implantierten Katheter und klemmen Sie den Schlauch mit einer sehr heißen, perlensterilisierten Dissektionszange fest, um den implantierten Katheter aseptisch zu schneiden und heiß zu versiegeln. Verwenden Sie resorbierbare monofile Nähte, um den heißversiegelten Katheter am Bindegewebe zu befestigen, und verwenden Sie dann nicht resorbierbare Nähte, um die Haut zu schließen. Waschen Sie dann mit Gaze und Kochsalzlösung das Blut von der Haut und legen Sie die Ratte in einen beheizten Brutkasten mit Überwachung, bis sie vollständig liegt.