Beurteilung der Atmosphärendruck-Plasmabehandlung in Neuroblastomzellen mit Glukosemangel

Nehmen Sie eine Kultur von Neuroblastomzellen in einer Multiwell-Platte mit Medien.

Ersetzen Sie die Medien in den Vertiefungen durch glukosefreie neuronale Medien, um oxidativen Stress zu induzieren.

Positionieren Sie die Platte unter der Plasmastrahldüse in einem optimalen Abstand, um eine gleichmäßige Belichtung zu gewährleisten.

Behandeln Sie ausgewählte Vertiefungen mit einer niedrigen Dosis Helium-basierter Atmosphärendruck-Plasmastrahl (APPJ), der kontrollierte Mengen an reaktiven Sauerstoff- und Stickstoffspezies erzeugt.

Inkubieren Sie die Zellen, um die Aktivierung von Stress-Reaktions-Signalwegen und die Hochregulierung von antioxidativen Enzymen in APPJ-behandelten Vertiefungen zu ermöglichen.

Zellen in unbehandelten Vertiefungen unter Glukoseentzug erleiden weitere oxidative Zellschäden.

Geben Sie das Reagenz für den Zellviabilitätsassay hinzu und inkubieren Sie. Lebensfähige Zellen reduzieren das Reagenz zu einem farbigen Produkt.

Messen Sie die Farbintensität mit einem Mikroplatten-Reader.

APPJ-behandelte Wells weisen aufgrund einer höheren Zellviabilität eine erhöhte Farbintensität auf, während unbehandelte Wells eine geringere Intensität aufweisen, was die neuroprotektive Wirkung von APPJ unter Glukoseentzug bestätigt.

Passen Sie den Abstand zwischen der Düse des Quarzrohrs und der Plattform, auf der die 96-Well-Platte platziert wird, auf drei Zentimeter an, um sicherzustellen, dass der Strahl die Oberfläche des Kulturmediums berühren kann. Wechseln Sie vor der Behandlung das Kulturmedium in jeder Vertiefung auf RPMI 1640 ohne Glukosemedium. Platzieren Sie nun die Platte unter der Atmosphärendruck-Plasmastrahldüse. Behandeln Sie dann die Zellen in separaten Vertiefungen für 0, 1, 2, 4, 8 und 12 Sekunden.

Nach der Behandlung inkubieren Sie die Zellen eine Stunde lang in einem Zellinkubator bei 37 Grad Celsius und anschließend mit 10 Mikrolitern Cell Counting Kit 8 Lösung in jede Vertiefung. Inkubieren Sie die Zellen dann vier Stunden lang bei 37 Grad Celsius. Messen Sie abschließend die Extinktion bei 450 Nanometern mit einem Mikroplatten-Reader.