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Beginnen Sie mit einer anästhesierten Maus mit einem chirurgisch freigelegten Genikulatganglion, einer Ansammlung von geschmacksverarbeitenden peripheren Neuronen.
Diese Neuronen exprimieren GCaMP, einen Kalziumindikator, der bei Kalziumbindung fluoresziert.
Entfernen Sie alle Flüssigkeiten, die das Ganglion bedecken, um eine klare Visualisierung zu ermöglichen.
Legen Sie die Maus auf ein saugfähiges Pad unter einem Mikroskop und lokalisieren Sie das Genikulatganglion anhand anatomischer Orientierungspunkte.
Mit einem geeigneten Filter am Epifluoreszenz-Oszilloskop kann die grüne Fluoreszenz von GCaMP-exprimierenden Neuronen nachgewiesen werden.
Führen Sie anschließend eine Dosiernadel, die mit dem Tastant Delivery Tube verbunden ist, in den Mund der Maus ein und geben Sie den Tastant ab.
Der Geschmack stimuliert die Geschmacksrezeptorzellen und setzt ATP frei, das an die Neuronenrezeptoren der Ganglien bindet und den Kalziumeinstrom auslöst.
Diese Kalziumionen binden an die GCaMPs und induzieren eine Fluoreszenzemission.
Richten Sie die Kamera auf das Sichtfeld des Mikroskops aus und synchronisieren Sie die Videoaufzeichnung mit der geschmackvollen Darbietung, um die neuronale Aktivität durch Fluoreszenzänderungen in Echtzeit zu erfassen.
Um das Taste-Panel zu betreiben, verwenden Sie ein Saugen, um die Flüssigkeit über dem Genikulat zu entfernen, und legen Sie die Maus auf ein saugfähiges Pad unter ein Präpariermikroskop. Nutze das Loch in der Bulla, das Loch im Schläfenbein und den siebten Nerv, um das Ganglion geniculatus zu lokalisieren. Und verwenden Sie den FITC/GFP-Filter am Epifluoreszenzskop, um nach einzelnen GCaMP-exprimierenden Genikulatganglienneuronen zu suchen. Setzen Sie die Dosiernadel für einen Geschmacksfaden fest in das Maul des Tieres ein. Synchronisieren Sie den Start der Videoaufzeichnung mit dem Beginn der leckeren Präsentation und beobachten Sie den Live-Feed auf Antworten.
