Analyse der dendritischen Morphologie in Drosophila medulla-Schichten und -Säulen

Beginnen Sie mit einem Glycerin-Cleared-Drosophila-Gehirn in Antifading-Einbettmedien.

Das Gehirn enthält Medulla-Neuronen, die in Schichten angeordnet sind, die synaptische Verbindungen organisieren, und Säulen, die neuronale Schaltkreise koordinieren.

Einige dieser Neuronen sind mit grün fluoreszierenden Markern markiert, die im Gegensatz zu den rot fluoreszierenden Photorezeptor-Axonen stehen.

Positionieren Sie die Bauchseite des Gehirns nach oben. Legen Sie ein Deckglas mit kleinen Tonflecken an den Seiten an, um ein Zerquetschen der Gehirnprobe zu verhindern.

Nehmen Sie unter einem Mikroskop den Bildstapel mit der horizontalen Ansicht auf, der das grün markierte Neuron enthält.

Entfernen Sie das Deckglas und positionieren Sie das Gehirn mit der vorderen Seite nach oben.

Erfassen Sie einen Bildstapel der Frontalansicht desselben Neurons.

Kombinieren Sie diese Bilder mit der Software, entfernen Sie den Photorezeptorkanal und visualisieren Sie das 3D-Bild des Neurons.

Verfolgen Sie das Axon und dann die Dendriten, folgen Sie jedem Zweig bis zu seinem Ende, um die dendritische Organisation über die Medullaschichten und -säulen hinweg zu kartieren.

Um das Gehirn in horizontaler Ausrichtung