Isolierung und Reinigung von rekombinanten Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen

MOGtag ist ein rekombinantes Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein, das mit Solubilisierungs- und Reinigungsmarkierungen für experimentelle Studien zur Autoimmunenzephalomyelitis fusioniert ist.

Um MOGtag zu isolieren, suspendieren Sie Bakterienzellen, die MOGtag exprimieren, in einem Lysepuffer und inkubieren Sie.

Enzyme und Detergenzien im Puffer stören die Membranlipide und bauen die Zellwand ab.

Beschallung, um die Zellen weiter zu lysieren und unlösliche Einschlusskörper freizusetzen, die MOGtag enthalten.

Zentrifugieren Sie, um die Einschlusskörper zu pelletieren. Entsorgen Sie den Überstand, suspendieren Sie das Pellet wieder im Puffer und inkubieren Sie.

Fügen Sie Guanidinhydrochlorid hinzu und inkubieren Sie, um MOGtag zu lösen.

Übertragen Sie die löslichen Proteine auf ein geladenes Nickelharz, mischen Sie sie und inkubieren Sie sie durch Schütteln, damit MOGtag an die Nickelionen binden kann.

Zentrifugieren Sie, um den gebundenen MOGtag zu pelletieren. Entfernen Sie den Überstand, suspendieren Sie das Pellet in einem Elutionspuffer und inkubieren Sie es unter Schütteln.

Imidazol im Elutionspuffer setzt MOGtag aus dem Harz frei.

Zentrifugieren Sie erneut, sammeln Sie den gereinigte