JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 2:15 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit Schwann-Zellen oder SCs, myelinisierenden Gliazellen des peripheren Nervensystems, die in Medien kultiviert werden.
Übertragen Sie die Zellen in eine kolorimetrische Schale, die auf beiden Seiten mit Elektroden ausgestattet ist.
Stellen Sie die Schüssel auf ein gepulstes elektrisches Feld oder nsPEF-Gerät im Nanosekundenbereich und stellen Sie die gewünschte Intensität des elektrischen Feldes ein.
Wenden Sie nsPEF-Impulse an, indem Sie die Elektroden vorsichtig drehen, bis Funken entstehen.
Trennen Sie unmittelbar nach der Stimulation die Elektroden und fahren Sie mit der Kultivierung der Zellen fort.
nsPEF bricht SC-Membranen auf und erzeugt transiente Nanoporen, die den Kalziumeinstrom ermöglichen. Die Membranen verschließen sich schließlich wieder.
Intrazelluläres Kalzium aktiviert Kalzium-bindende Proteine und löst Signalwege aus, die Gene hochregulieren, die an der Progression des Zellzyklus beteiligt sind.
Eine anhaltende Kalzium-Signalübertragung aktiviert auch Transkriptionsfaktoren, die die Dedifferenzierung von SCs in einen Reparaturphänotyp und die anschließende Proliferation vorantreiben.
Darüber hinaus nimmt die Sekretion von neurotrophen Faktoren, die das Überleben und Wachstum der Neuronen unterstützen, zu.
Das Modell ist nun bereit, die Rolle von nsPEF-stimulierten SCs bei der Regeneration peripherer Nerven nach einer Verletzung zu untersuchen.
Zu Beginn resuspendieren Sie die kultivierten RSC96-Zellen in 1 Milliliter DMEM-Kulturmedium und überführen Sie sie in kolorimetrische Schalen mit Elektroden auf beiden Seiten. Schalten Sie den Netzschalter des Instruments ein und drehen Sie den Knopf, um die Intensitäten des elektrischen Feldes einzustellen. Drehen Sie die Elektroden vorsichtig, bis Funken entstehen, so dass die Zellen 5 Impulse von gepulsten elektrischen Feldern im Nanosekundenbereich entsprechend den voreingestellten Feldstärkeintensitäten empfangen können. Trennen Sie die beiden Elektroden sofort nach der Behandlung.