JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 2:25 Min. • August 7th, 2025
Nehmen Sie einen Mikroinjektor mit einer Mikronadel, die einen hocheffizienten retrograden Transport- oder HiRet-Virusvektor enthält.
Die Glykoproteine in der HiRet-Virushülle erleichtern den Eintritt in Neuronen über Synapsen. Das Virus trägt auch ein Gen, das für ein fluoreszierendes Protein kodiert.
Nehmen wir eine anästhesierte Ratte mit einem freiliegenden lumbalen Rückenmark 1 bis 4.
Positionieren Sie die Nadel anhand der Mittellinie des Rückenmarks über der Injektionsstelle.
Senke die Nadel in das Rückenmark.
Beginnen Sie mit der Verabreichung des Virus in kontrollierter Geschwindigkeit.
Lassen Sie ausreichend Zeit für die Virusdiffusion, bevor Sie die Nadel zurückziehen.
Neuronale Rezeptoren binden an virale Glykoproteine und erleichtern so den Eintritt des Virus über die Synapse und den Transport durch das Axon zum Soma, ein Prozess, der als retrograder Transport bezeichnet wird.
Das virale Gen wird in das Wirtsgenom integriert und ermöglicht so die Expression fluoreszierender Proteine.
Diese Viren wandern auch durch verbundene Neuronen und ermöglichen so die Verfolgung neuronaler Bahnen.
Platzieren Sie die Nadel in der Mittellinie des Rückenmarks und richten Sie die Nadel mit der Nonius-Skala am Mikromanipulator seitlich um 0,8 Millimeter aus. Senken Sie dann die Nadel auf das Rückenmark ab, bis sie einkerbt, aber nicht in die Dura sticht. Und mit einer schnellen Drehbewegung die Dura mit der Nadel so lange durchstechen, bis die Nadelspitze bis zu einer Tiefe von 1,5 Millimetern eingesunken ist.
Sobald die Nadel an Ort und Stelle ist, programmieren Sie den Injektor so, dass er das Virus mit einer Geschwindigkeit von 400 Nanolitern pro Minute abgibt, und bestätigen Sie, dass das Virus in das Rückenmark eindringt, indem Sie den Fortschritt der Farbstofffront beobachten. Lassen Sie die Nadel nach Beendigung der Injektion zwei bis fünf Minuten lang im Rückenmark ruhen, um die Diffusion des Virus zu erleichtern, bevor Sie die Nadel langsam zurückziehen, um sie an der nächsten Injektionsstelle zu positionieren.