Gezielte Abgabe von Substanzen an das Gehirn der Maus über Infusion in die Arteria carotis interna

Nehmen Sie eine anästhesierte Maus mit einer freiliegenden Arteria carotis communis (CCA), die sich in die Arteria carotis externa (ECA) und die Arteria carotis interna (ICA) gabelt.

Vernähen Sie die distale ECA fest, platzieren Sie einen losen Knoten in der Nähe der Bifurkation und schneiden Sie dann CCA und ICA ab, um den Blutfluss einzuschränken.

Schneiden Sie die ECA ein und führen Sie dann eine Kapillare ein, die mit einer Spritze verbunden ist, die die Prüfsubstanz enthält.

Schieben Sie die Kapillare zwischen der Bifurkation und dem CCA-Clip vor und sichern Sie sie dann, indem Sie den proximalen ECA-Knoten festziehen.

Entfernen Sie den ICA-Clip und infundieren Sie die Substanz für eine gezielte Abgabe an das Gehirn, während die systemische Zirkulation umgangen wird.

Die Substanz überwindet die Blut-Hirn-Schranke, um das Hirnparenchym zu erreichen.

Sobald die ECA und ICA freigelegt sind, verwenden Sie eine Pinzette, um ein Segment aus 1 Zentimeter Nylonnaht unter die äußere Halsschlagader zu legen, und platzieren Sie dann ein zweites 1 Zentimeter langes Segment. Dann binden Sie einen dauerhaften Knoten an der höchstmöglichen Stelle des ECA.

An der tiefstmöglichen Stelle des ECA unmittelbar über der CCA-Bifurkation einen lockereren, abnehmbaren Knoten binden. Verwenden Sie dann Gefäßklammern, um den CCA an der tiefstmöglichen Stelle zu schließen und den ICA zu schließen.

Wenn Sie die Arteria carotis interna richtig verschließen, bevor Sie einen kleinen Schnitt in die Arteria carotis externa machen, können Sie Blutungen verhindern.

Machen Sie nun mit einer Mikrodissektions-Federschere einen 2-Millimeter-Schnitt in der ECA zwischen den beiden Knoten.

Es ist wichtig, den Schnitt klein zu halten, da ein großer Schnitt dazu führt, dass die zu infundierende Substanz austritt.

Bauen Sie das Infusionssystem zusammen, indem Sie einen 6 Zoll langen Kapillarschlauch an eine Tuberkulinspritze anschließen, die 250 Mikroliter der zu infundierenden Substanz enthält. Führen Sie dann die Spitze des Kapillarschlauchs vorsichtig in den Schnitt in der ECA ein. Schieben Sie die Spitze weiter vor, bis sie die Mitte zwischen der Bifurkation und dem Clip am CCA erreicht.

Binden Sie den unteren ECA-Knoten fest. Stellen Sie sicher, dass der Knoten locker genug ist, um die Kapillarflüssigkeit zu ermöglichen, und fest genug, um ein Auslaufen zu verhindern. Entfernen Sie dann den Clip aus dem ICA. Üben Sie vorsichtig Druck auf den Spritzenkolben aus, so dass die Substanz mit einer Infusion von etwa 10 Mikrolitern pro Sekunde infusionsfähig ist.

Nach der Infusion der Prüfsubstanz setzen Sie den Clip wieder auf den ICA. Entfernen Sie vorsichtig den Kapillarschlauch und binden Sie dann den unteren ECA-Knoten vollständig fest. Entfernen Sie den Clip vom ICA und vom CCA. Entfernen Sie dann den Retraktor oder die Gewebehaken und das Kissen.

Reinigen Sie den zu nähenden Bereich mit steriler Kochsalzlösung und verschließen Sie dann den Schnitt mit Nylonnähten. Nach der Verabreichung eines zugelassenen entzündungshemmenden Mittels und eines Analgetikums zur Linderung der postoperativen Beschwerden legen Sie das Tier mindestens eine Stunde lang in einen Käfig auf einem Heizkissen und überwachen Sie die Genesung.