Transplantation von Interneuronen-Vorläuferzellen in das Gehirn eines Mäusewelpen

0 Ansichten3:26 Min. • June 17th, 2025

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Beginnen Sie mit einem betäubten Empfängermauswelpen. Sichern Sie den Kopf mit Klebeband und stellen Sie sicher, dass der Schädel freiliegt.

Verwenden Sie das anatomische Referenz-Lambda, um die Zielregion des Gehirns zu lokalisieren.

Positionieren Sie eine Mikropipette über der Zielregion, die mit einer Suspension von Interneuronen-Vorläuferzellen beladen ist, die in der Lage sind, sich in reife Interneuronen zu differenzieren.

Diese Vorläuferzellen stammen aus dem Kortex, dem Striatum oder dem Hippocampus eines Spenderwelpen im selben Entwicklungsstadium wie der Empfänger.

Injizieren Sie die Suspension in das Gehirn, um entweder eine homotope Transplantation durchzuführen, bei der Vorläufer in ihre Herkunftsregion abgegeben werden, oder eine heterotope Transplantation, bei der sie in eine andere Gehirnregion eingeführt werden.

Lassen Sie die Suspension diffundieren, bevor Sie die Mikropipette zurückziehen, um einen Rückfluss zu verhindern.

Übertragen Sie den Welpen zur Erholung auf ein Wärmekissen.

Das Überleben und die Reifung der Spendervorläufer im Gehirn des Empfängerwelpen können nun ausgewertet werden.

Befüllen Sie eine Mikropipette mit feiner Spitze mit Mineralöl. Befestigen Sie die Mikropipette an einem Nanoliter-Injektor und befestigen Sie die Nanoliter-Injektionsvorrichtung an einem Manipulator, der an einer Magnetbasis befestigt ist. Während der erste Welpe auf Eis betäubt wird, pipettieren Sie die Zelllösung mehrmals, um eine homogene Zellverteilung zu gewährleisten.

Stoßen Sie das Mineralöl aus und füllen Sie die Pipette vollständig mit der Einzelzellsuspension. Nachdem Sie bestätigt haben, dass Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren, legen Sie den Welpen auf eine Petrischale, wobei der Kopf auf Klebekitt ruht, so dass die Oberseite des Kopfes relativ flach ist.

Decken Sie den Kopf mit einem Stück Laborband mit einem Diamantloch ab und ziehen Sie das Band straff, bis die Haut gedehnt ist, so dass der Kopf fest fixiert ist und Lambda durch das Loch sichtbar ist. Schieben Sie den gesicherten Pup unter den Nanoliter-Injektor und senken Sie die Mikropipette so ab, dass sich die Spitze direkt über Lambda befindet.

Beobachten Sie die x- und y-Koordinaten am Manipulator und stellen Sie die Manipulatorknöpfe ein, bis die Mikropipette an den entsprechenden Koordinaten entlang der mediolateralen und anteroposterioren Achse des Kopfes positioniert ist. Senken Sie die Mikropipette ab, bis die Spitze eine kleine Konkavität auf der Haut bildet, und drehen Sie den Manipulatorknopf der Z-Achse fest, aber vorsichtig, um die Mikropipette durch die Haut und den Schädel in das Gehirn zu treiben.

Ziehen Sie die Mikropipette leicht zurück, bis die Spitze von einem Hautkegel umgeben ist, der wie ein Zelt geformt ist, und zeigen Sie die Koordinaten entlang der z-Achse an. Senken Sie dann die Mikropipette auf die entsprechende Versuchstiefe ab und injizieren Sie die Zellen. Warten Sie 15 Sekunden nach der Abgabe der Zellen, bevor Sie die Mikropipette zurückziehen, und wiederholen Sie die Injektion bei Bedarf an einer zweiten Stelle. Legen Sie den Welpen auf ein Heizkissen und überwachen Sie, bis die vollständige Genesung erreicht ist, bevor Sie ihn wieder in den Heimkäfig bringen.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026