Intrathekale Verabreichung von Viren in einem Mausmodell zur Behandlung von Erkrankungen des Zentralnervensystems

Füllen Sie eine Spritze mit einer Lösung, die Adeno-assoziierte Viren (AAV) und Lidocain, ein Lokalanästhetikum, enthält.

Lege eine wache Maus in Bauchlage und bedecke ihren Oberkörper.

Halten Sie den Beckengürtel der Maus fest und rasieren Sie den unteren Rücken, um die Haut freizulegen. Sterilisieren Sie es mit Jod und Ethanol.

Lokalisieren Sie die Lücke im unteren Rücken und drücken Sie vorsichtig, um sie zu markieren.

Drehen Sie den Schwanz, um die Wirbelsäule auszurichten, und führen Sie die Spritze senkrecht ein.

Passen Sie den Winkel an, bis ein Schwanzschlag erfolgt, der den Eintritt der Nadel in den intrathekalen Raum bestätigt, in den die Zerebrospinalflüssigkeit oder der Liquor fließt.

Injizieren Sie die Lösung langsam für eine gleichmäßige Verteilung.

Die Viruspartikel binden an Neuronen, dringen in das Zellkern ein und geben ihr Erbgut in den Zellkern ab, wodurch eine gezielte Genexpression ermöglicht wird.

Lidocain blockiert vorübergehend Nervensignale, was zu einer kurzfristigen Beinlähmung führt, was die erfolgreiche Entbindung im Liquor bestätigt.

Dieses Protokoll etabliert die intrathekale Verabreichung als wirksame Methode zur Behandlung von ZNS-Erkrankungen.

Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, befestigen Sie eine 27-Gauge-Nadel an einer 25-Mikroliter-Hamilton-Spritze und richten Sie die abgeschrägte Spitze der Nadel mit der volumetrischen Skala auf der Spritze aus, laden Sie dann vorsichtig 8 Mikroliter von 4 mal 10 bis 10 Genomkopien der Viruslösung in die Spritze, wobei Sie darauf achten, Blasen zu vermeiden.

Legen Sie als nächstes eine wache 30 bis 70 Tage alte, 12 bis 30 Gramm schwere Maus in Bauchlage in eine Biosicherheitshaube auf ein Bettstück und bedecken Sie den Oberkörper mit steriler Gaze, um die Maus zu beruhigen und nicht gebissen zu werden. Fassen Sie die Maus fest an ihren Beckengürtel, mit einem Daumen auf der einen Seite und dem Zeige- und Mittelfinger auf der anderen Seite, halten Sie die Haut zwischen den beidseitigen Beckengürteln mit Daumen und Zeigefinger straff, rasieren Sie dann das Fell zwischen den beidseitigen Beckengürteln und sterilisieren Sie die freiliegende Haut mit einem Peeling auf Jodidbasis und 70% Ethanol.

Für eine direkte intrathekale Verabreichung der Adeno-assoziierten Viruslösung tasten Sie den Zwischenwirbelraum entlang der Mittellinie zwischen den beidseitigen Beckengürteln ab und drücken Sie mit einem Fingernagel eine Vertiefung in die Haut, um den Zwischenwirbelraum L5 bis L6 anzuzeigen. Drehen Sie die Basis des Schwanzes leicht und vorsichtig, um die Mittellinie der Wirbelsäule freizulegen, und stellen Sie die Abschrägung der Nadel in Richtung des Kopfes des Tieres ein. Halten Sie die Maus fest in Position, richten Sie die Nadel entlang der Mittellinie der Wirbelsäule aus und führen Sie die Nadel vorsichtig und vertikal in die Mitte der Vertiefung ein, wobei Sie die Spritze in einer zentralen Sagittalebene halten.

Wenn die Nadel mit dem Knochen in Berührung kommt, verringern Sie den Winkel langsam auf etwa 30 Grad und schieben Sie die Nadel in den Zwischenwirbelraum. Ein plötzliches Schwanzschlagen ist ein Zeichen für einen erfolgreichen Eintritt in den intraduralen Raum. Wenn die Nadel in den Zwischenwirbelraum eintritt, fühlt sich die Spitze fest geklemmt an. Injizieren Sie die Vektorlösung und halten Sie die Nadel eine Minute lang im Intraduralraum, dann ziehen Sie die Nadel langsam mit Rotation zurück, um ein Auslaufen zu minimieren.