Name: Flash-Photolyse von Caged Compounds in den Zilien der Riechzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Erfahren Sie die Flash-Photolyse von caged Verbindungen in Riechzellenzilien zur Untersuchung olfaktorischer Signaltransduktion. Diese Methode ermöglicht präzise Kontrolle über neuronale Signalwege in Maus-Riechneuronen.

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<ol><li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caged+compounds%3A+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li>
<li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li>
<li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li>
<li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV%2FVis-Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li>
<li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li>
<li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li>
<li>Gurney, A. M. Flash photolysis of caged compounds. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGurney%2C+AM+%22Microelectrodes%3A+Theory+and+Applications%22">Microelectrodes: Theory and Applications</a>. Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. , Proc. NATO Adv. Study Inst. Portugal. (1991).</li>
<li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li>
<li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li>
<li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2%2B+-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li>
<li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li>
<li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li>
<li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li>
<li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode%3A+an+efficient%2C+compact%2C+and+affordable+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Calcium%22%5BJournal%5D)">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Flash-Photolyse von caged Verbindungen mit Patch-Clamp-Aufnahmen kombiniert ist eine nützliche Technik, um schnelle und lokale Sprünge in der Konzentration der physiologisch aktive Moleküle sowohl innerhalb als auch außerhalb der Zellen zu erhalten. Mehrere Arten von Käfigen Verbindungen1 wurden synthetisiert, und diese Technik kann auf verschiedene Arten von Zellen, einschließlich kultivierten Zellen, die Ionenkanäle, die aktiviert oder moduliert werden durch Photolyse von einigen der verfügbaren caged Verbindungen <su...

<table border="1"><tbody><tr><th> Ausrüstung </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare </th></tr><tr><td> Adapter-Modul Flash-Lampe Mikroskop </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> Blitzwürfel 70 </td><td></td></tr><tr><td> Air Tisch </td><td> TMC </td><td> MICRO-g 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Digitizer </td><td> Axon Instruments </td><td> Digidata 1322a </td><td></td></tr><tr><td> Data Acquisition Software </td><td> Axon Instruments </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> Data Analysis Software </td><td> WaveMetrics </td><td> Igor </td><td></td></tr><tr><td> Spiegel für Adapter-Modul </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrodenhalter </td><td> Axon Instruments </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> Faraday-Käfig </td><td> Custom made </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filter-Würfel </td><td> Olymp </td><td> U-MWU </td><td> Excitation Filter entfernt </td></tr><tr><td> Flash-Lampe </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> Pinzetten Dumont Nr. 55 </td><td> World Precision Instruments </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> Glaskapillaren </td><td> World Precision Instruments </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> Glasboden Gericht </td><td> World Precision Instruments </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> Illuminator </td><td> Olymp </td><td> Highlight 3100 </td><td></td></tr><tr><td> Inverse Mikroskop </td><td> Olymp </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipulatoren </td><td> Luigs &amp; Neumann </td><td> SM I </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette Puller </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Monitor </td><td> HesaVision </td><td> MTB-01 </td><td></td></tr><tr><td> Neutralfilter </td><td> Omega Optical </td><td> variiert </td><td></td></tr><tr><td> Ziel 100X </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440285 </td><td> Entweder Zeiss oder Olympus </td></tr><tr><td> Ziel 100X </td><td> Olymp </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> Entweder Zeiss oder Olympus </td></tr><tr><td> Optische UV Kurzpassfilter </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Patch-Clamp-Verstärkers </td><td> Axon Instruments </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> Photo Diode Assembly </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> PDA </td><td></td></tr><tr><td> Quartz-Lichtleiter </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> variiert </td><td> Wir verwenden 600 pm Durchmesser </td></tr><tr><td> Silberdraht </td><td> World Precision Instruments </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> Silber Boden Pellet </td><td> Warner Instrumente </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> Xenon-Bogenlampe </td><td> Rapp Optoelectronic </td><td> XBL-JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><th> Reagens </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> BCMCM-caged cAMP </td><td> BioLog </td><td> B016 </td></tr><tr><td> Rinderserumalbumin (BSA) </td><td> Sigma </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2-Standard-Lösung 0,1 M </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Caged Ca: DMNP-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> Cystein </td><td> Sigma </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Concanavalin A-Typ V (ConA) </td><td> Sigma </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> Sigma </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Sigma </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> Glucose </td><td> Sigma </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Sigma </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> KOH </td><td> Sigma </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> Sigma </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> Papain </td><td> Sigma </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> Poly-L-Lysin </td><td> Sigma </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Sigma </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> Sigma </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

flash-photolyse von caged compounds in den zilien der riechzellen

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolyse von caged-Verbindungen ermöglicht die Produktion von schnellen und lokalisierten Anstieg der Konzentration von verschiedenen physiologisch aktive Verbindungen 1. Caged-Verbindungen sind Moleküle aus physiologisch inaktiv durch eine chemische Käfig, der durch einen Blitz von UV-Licht gebrochen werden kann. Hier zeigen wir, wie Patch-Clamp-Aufnahmen mit der Photolyse von caged-Verbindungen für das Studium der olfaktorischen Wahrnehmung in dissoziierten Maus Riechzellen kombiniert zu erhalten. Der Prozess der olfaktorischen Wahrnehmung (Abbildung 1) erfolgt in den Cilien von Riechzellen, wo Geruchsstoff Bindung an Rezeptoren führt zu einer Erhöhung der cAMP, dass zyklische Nukleotid-gesteuerte (CNG)-Kanäle 2 öffnet. Ca Eintrag durch CNG-Kanäle aktiviert Ca-aktivierte Cl-Kanäle. Wir zeigen, wie die Neuronen aus dem olfaktorischen Epithel der Maus 3 und wie CNG-Kanäle oder Ca-aktivierte Cl-Kanäle durch Photolyse von caged cAMP 4 oder caged Ca 5 aktivieren distanzieren &lt;/ Sup&gt;. Wir verwenden eine Blitzlampe 6,7 gegenüber UV-Blitze, die Ciliargegend gelten Uncage cAMP oder Ca während Patch-Clamp-Aufnahmen getroffen werden, um den Strom in der whole-cell Voltage-Clamp-Konfiguration 8-11 messen.

Photolyse von caged-Verbindungen ermöglicht die Produktion von schnellen und lokalisierten Anstieg der Konzentration von verschiedenen physiologisch aktiven Verbindungen. Hier zeigen wir, wie Patch-Clamp-Aufnahmen mit der Photolyse von caged cAMP kombiniert oder caged Ca für das Studium der olfaktorischen Wahrnehmung in dissoziierten Maus Riechzellen erhalten.

Flash-Photolyse von Caged Compounds in den Zilien der Riechzellen

Die Photolyse von gekäfigten Verbindungen ermöglicht die Erzeugung schneller und lokalisierter Konzentrationserhöhungen verschiedener physiologisch aktiver Verbindungen1. ...

Unser Geruchssinn ermöglicht es uns, flüchtige Chemikalien in der äußeren Umgebung zu erkennen und zu identifizieren. Anz bindet an Rezeptoren im Bereich der olfaktorischen Sinnesneuronen und aktiviert eine Transduktionskaskade, die zur Öffnung zyklischer nucleotidgesteuerter Kanäle gefolgt von calciumaktivierten Chloridkanälen führt. Das Gesamtziel dieses Verfahrens besteht darin, zu zeigen, wie man diese Kanäle direkt durch Licht aktivieren kann, um „cage“-Verbindungen freizusetzen. „Cage“-Verbindungen sind Moleküle, die durch eine chemische Schutzgruppe physiologisch inaktiv gemacht wurden.Ein Lichtblitz im ultravioletten Bereich spaltet eine Cagesubstanz und setzt die physiologisch aktive Verbindung frei. Cycl, mp oder cagegebundenes Calcium werden in die intrazelluläre Lösung gegeben, füllen eine Patch-Pipette und diffundieren in das Zellinnere olfaktorischer Sinnesneuronen. Ein ultravioletter Blitz wird auf den Cary-Bereich appliziert, um eine Freisetzung von Cycl, mp oder Calcium auszulösen, während mittels Patch-Clamp-Aufzeichnungen der Strom im Ganzzell-Spannungs-Klemm-Modus gemessen wird.Hallo. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren für Patch-Clamp-Aufnahmen in Kombination

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Wir beschreiben eine etablierte Technik zur Messung und Analyse Gerüche hervorgerufene Kalzium-Reaktionen im Antennallobus...

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Flash-and-Freeze-: eine neuartige Technik Membrandynamik mit Elektronenmikroskopie zu erfassen

Synaptischen Vesikel (SV) Radfahren ist der Kern-Mechanismus der interzellulären Kommunikation bei neuronalen Synapsen. FM-Farbstoff-Aufnahme und Veröffentlichung sind die Primärmittel des quantitativ prüfen SV Endo- und Exozytose. Hier vergleichen wir alle stimulationsmethoden FM1-43 Radfahren an der Drosophila neuromuskulären (NMJ) Modell Synapse zu fahren.

FM-Farbstoff Radfahren an der Synapse: Vergleich hohen Kalium Depolarisation, elektrische und Channelrhodopsin Stimulation

Erfahren Sie die Flash-Photolyse von caged Verbindungen in Riechzellenzilien zur Untersuchung olfaktorischer Signaltransduktion. Diese Methode ermöglicht präzise Kontrolle über neuronale Signalwege in Maus-Riechneuronen.

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