JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:35 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer adhärenten Kultur von primären Astrozyten der Maus auf einem Deckglas in einer Kulturschale.
Inkubieren Sie mit einer fluoreszierenden acidotropen Sonde, die intakte Zellmembranen durchquert, um in die Astrozyten einzudringen.
Die Sonde reichert sich selektiv in sauren endolysosomalen Vesikeln an und markiert die Vesikel fluoreszierend, um ihren Transport zu überwachen.
Waschen, um überschüssige Sonde zu entfernen, und frisches Medium hinzufügen.
Legen Sie die Kultur unter ein konfokales Mikroskop und fokussieren Sie sich auf eine einzelne Zelle, um eine Zeitraffer-Bildgebung durchzuführen.
Visualisieren Sie die markierte Fracht als fluoreszierende Punkte, die innerhalb der perinukleären Region, des
Zytosols und der astrozytären Prozesse
verteilt sind.Erfassen Sie mehrere Fokusebenen entlang der Z-Achse, um die Fracht im gesamten dreidimensionalen Zellenvolumen zu visualisieren.
Führen Sie Bildgebung in definierten Intervallen durch, um den intrazellulären Frachttransport in verschiedenen Tiefen innerhalb der Astrozyten zu verfolgen.
Analysieren Sie die Frachtbewegung, um zwischen stationärer Fracht, Fracht, die sich in Richtung der Zellperipherie bewegt, und Fracht
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