JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:28 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer anästhesierten, immunkompetenten Maus mit Luciferase-exprimierenden Tumorzellen, die in das Hirngewebe implantiert wurden.
Der Maus wird auch Luciferin verabreicht, ein Substrat für das Luciferase-Enzym.
Das Luciferin zirkuliert im Blutkreislauf, überquert die Blut-Hirn-Schranke und erreicht die Luciferase-exprimierenden Tumorzellen.
Richten Sie das Bildgebungssystem mit Parametern ein, um biolumineszierende Signale von Luciferase-exprimierenden Tumorzellen zu messen.
Platzieren Sie die anästhesierte Maus in der Biolumineszenz-Bildgebungskammer und nehmen Sie Bilder auf.
Luciferin dringt in die Zelle ein und interagiert mit dem Luciferase-Enzym, wodurch ein biolumineszierendes Signal erzeugt wird, das proportional zur Anzahl der Tumorzellen ist.
Verwenden Sie das Werkzeug "Region of Interest", um einen Signalbereich zu definieren und das Biolumineszenzsignal zu quantifizieren.
Um das Tumorwachstum zu beurteilen, wiederholen Sie die Bildgebung über mehrere Tage und messen Sie das Lumineszenzsignal aus demselben Bereich.
Im Laufe der Zeit beginnen sich Zellen, die Luciferase exprimieren, zu vermehren und bilden ein Glioblastom oder einen Tumor.
Die Zunahme der Lumineszenzsignale bestätigt das Wachstum des Glioblastoms.
Um das Wachstum des intrakraniellen Tumors abzubilden, initialisieren Sie zunächst die Bildgebungsstation, wie gerade gezeigt.
Nachdem Sie den entsprechenden Sedierungsgrad durch Schwanzkneifen bestätigt haben, stellen Sie die Parameter des Bildgebungssystems wie gerade gezeigt ein, mit Ausnahme der Auswahl von Auto für die Belichtungszeit. Wenn das Bildgebungssystem bereit ist, setzen Sie die Mäuse auf die Bildgebungsstation und wählen Sie Erfassen, um Bilder der Luciferase-Expression zu erhalten. Wenn das Bild erfolgreich aufgenommen wurde, wählen Sie das Werkzeug "Interessenbereich" aus der Werkzeugpalette und "Auto" aus dem Kreissymbol aus.
Kreisen Sie die Signalbereiche ein, um die interessierenden Bereiche zu definieren. Und dann erhalten Sie Messungen der Regionen als Einheiten von Photonen pro Sekunde pro Steradiant pro Quadratzentimeter. Nehmen Sie schließlich die Mäuse aus der Bildgebungskammer und überwachen Sie die tumortragenden Tiere, bis sie vollständig genesen sind.