Subretinale Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigmentepithel in einem Mausmodell

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus und tragen Sie ein pupillenerweiterndes Mittel auf.

Öffnen Sie unter einem Mikroskop das Augenlid und strecken Sie das Auge leicht hervor, um die Injektionsstelle freizulegen.

Tragen Sie einen Tropfen ophthalmische viskoelastische Lösung auf und legen Sie dann ein Deckglas auf, um die Netzhaut sichtbar zu machen.

Stechen Sie mit einer feinen Nadel ein Loch hinter den Hornhaut-Sklera-Übergang, um Schäden an den Blutgefäßen und der Linse zu vermeiden.

Führen Sie durch dieses vorpunktierte Loch eine stumpfe Spritze tangential in den subretinalen Raum in der Nähe des retinalen Pigmentepithels oder RPE ein, das die Netzhautneuronen stützt.

Injizieren Sie den lentiviralen Vektor, der die Zielgene trägt, in den subretinalen Raum.

Beobachten Sie die Bildung einer subretinalen Blase aufgrund von Flüssigkeitsansammlungen, die die erfolgreiche Vektorabgabe bestätigen.

Schließen Sie vorsichtig das Augenlid, um die Injektionsstelle abzudecken, und lassen Sie die Maus sich erholen.

Das Lentivirus dringt über Endozytose in das RPE ein, setzt sein genetisches Material frei und wandelt es in die entsprechende DNA um, die sich in das Wirtsgenom integriert und so die Gen