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Nehmen Sie eine Quarz-Mikronadel mit individuellen Löchern, die an einer mit Wasser gefüllten Spritze befestigt und mit einer Mikropumpe verbunden ist, um die Fördermenge zu steuern.
Nehmen Sie eine gesicherte, betäubte Ratte mit der freiliegenden Injektionsstelle.
Positionieren Sie die Mikronadel und legen Sie einen Paraffinfilm darunter. Geben Sie einen Tropfen der Injektionslösung darauf.
Ziehe das Wasser zurück, um eine Luftblase zu erzeugen, und senke dann die Mikronadel ab, um die Lösung zu ziehen.
Lassen Sie einen Tropfen entstehen, um einen freien Durchgang zu gewährleisten.
Verwende eine scharfe Nadel, um die Membran des Gehirns zu durchstechen.
Führen Sie die Mikronadel bei niedriger Fördergeschwindigkeit ein, um ein Eindringen von Gewebefragmenten in die Nadel zu verhindern.
Sobald Sie positioniert sind, gehen Sie etwas tiefer. Stoppen Sie die Auslage und heben Sie sie wieder an, um einen Rückfluss zu vermeiden.
Starten Sie die Auslieferung mit erhöhter Geschwindigkeit. Die Löcher in der Nadel sorgen für eine optimale Verteilung der injizierten Lösung.
Lassen Sie genügend Zeit, bevor Sie die Nadel zurückziehen, um die Diffusion zu erleichtern.
Schneide ein kleines Stück Paraffinfolie aus Plastik ab und lege es auf den Schädel. Mit der 10-Mikroliter-Pipette einen Tropfen der Lösung auf den Paraffinfilm aus Kunststoff geben. Stoppen Sie die Pumpe. Ziehen Sie den Drücker der Pumpe leicht zurück und erzeugen Sie eine kleine Luftblase in der Kapillare, indem Sie vorsichtig am Kolben der Mikroinjektionsspritze ziehen.
Senke die Spitze der Nadel ab, bis sie den Tropfen erreicht. Entnehmen Sie die Probe, indem Sie den Kolben der Mikroinjektionsspritze sehr langsam ziehen, um Blasenbildung zu vermeiden. Setzen Sie den Pumpenschieber in Kontakt mit dem Kolben wieder ein und schalten Sie die Pumpe mit einer Durchflussmenge von 0,3 Mikrolitern pro Minute ein.
Warten Sie dann, bis sich ein Tropfen gebildet hat, bevor Sie mit dem nächsten Schritt fortfahren. Verringern Sie anschließend den Durchfluss auf 0,1 Mikroliter pro Minute. Stechen Sie die Dura mit einer abgeschrägten Nadel aus Edelstahl ein und senken Sie die Nadel langsam ab, um in das Hirngewebe einzudringen. Wenn die gewünschte Position erreicht ist, gehen Sie weitere 0,1 Millimeter nach unten und stoppen Sie dann die Pumpe.
Heben Sie den stereostatischen Arm um 0,1 Millimeter an und starten Sie die Pumpe wieder mit 0,3 Mikrolitern pro Minute. Starten Sie danach den Timer und die Injektion. Überwachen Sie die Bewegung der Blase während der Injektion. Stoppen Sie am Ende die Pumpe und warten Sie fünf Minuten, bevor Sie die Nadel langsam herausholen.