JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:31 Min. • August 7th, 2025
Nehmen Sie eine betäubte Ratte und tragen Sie Augenschmiermittel auf.
Rasieren Sie die Zielgliedmaße, sterilisieren Sie die Haut und positionieren Sie die Ratte, um einen optimalen Zugang zum Zielmuskel zu gewährleisten.
Heben Sie die Haut an und schneiden Sie sie ein, um den Muskel freizulegen.
Beziehen Sie sich auf Fotos von motorischen Endplatten oder MEPs, den Regionen, in denen die Axonenden der Motoneuronen mit den Muskelfasern synapsieren, um neuromuskuläre Verbindungen zu bilden.
Bilden Sie die MEP-Region mental auf den freiliegenden Muskel ab.
Nehmen Sie eine Mikropipette aus Glas, die einen fluoreszierenden Tracer enthält.
Injizieren Sie den Tracer intramuskulär an mehreren Stellen entlang der MEP-Region.
Entfernen Sie überschüssigen Tracer, schließen Sie den Schnitt und verabreichen Sie ein Schmerzmittel.
Die Injektion erhöht die Verfügbarkeit von Tracern an neuromuskulären Verbindungen und erleichtert die Endozytose an den Axonendigungen.
Die in den Vesikeln eingeschlossenen Tracer werden dann retrograd zu den Zellkörpern der Motoneuronen im Rückenmark transportiert.
Das Vorhandensein von Tracer-markierten Motoneuronen im Rückenmark deutet auf das neurotherapeutische Potenzial einer MEP-gerichteten Verabreichung hin.
Um den lebenden Muskel an den Motorendplatten zu injizieren, verwenden Sie zunächst einen Mikropipettenabzieher, um abgestufte Glasmikropipetten zu ziehen, die mit Kolben ausgestattet sind. Brechen Sie anschließend mit einem Präpariermikroskop die Spitzen der Mikropipetten mit einer Pinzette so, dass der Innendurchmesser jedes Lumens etwa 0,5 Millimeter beträgt. Füllen Sie dann die gezogenen Pipetten mit Fluor-Gold.
Tragen Sie nun Augengleitmittel auf ein anästhesiertes Tier auf und rasieren Sie die Gliedmaße, die injiziert werden soll. Wischen Sie die rasierte Stelle mit Gaze abwechselnd mit drei Peelings aus Chlorhexidin und 70% Alkohol ab. Legen Sie das Tier dann auf ein sauberes Unterpolster, um den Zugang zum Zielmuskel zu ermöglichen. Wenn das Tier in Position ist, heben Sie die Haut mit einer Zange mit Zahngriffen über den Zielmuskel von der darunter liegenden Muskulatur weg und verwenden Sie eine chirurgische Schere, um einen Schnitt in die Haut zu machen.
Achten Sie darauf, dass der Schnitt groß genug ist, um den interessierenden Muskel vollständig freizulegen, mit einer minimalen Störung der Faszie. Dann wurden unter Verwendung der Fotos der motorischen Endplatte die Position und Form des interessierenden Bereichs der motorischen Endplatte mental auf den Muskel übertragen, und es wurden 3 bis 4 Injektionen von 1 bis 2 Mikrolitern Fluorgold über die gesamte Länge des Bereichs der motorischen Endplatte verabreicht.
Wischen Sie den Muskel nach der letzten Injektion vorsichtig ab, um eventuelles Durchsickern zu entfernen. Bringen Sie dann mit einer stumpfen Pinzette die beiden Enden der eingeschnittenen Haut nahe zusammen. Verschließen Sie die Wunde mit chirurgischen Klammern und infiltrieren Sie die gesamte Wundspanne mit dem entsprechenden Lokalanästhetikum.