JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:59 Min. • August 7th, 2025
Füllen Sie eine Mikropipette mit einer DNA-Mischung, die Plasmidvektoren enthält, die das interessierende Gen tragen, und einen Tracking-Farbstoff. Sichern Sie es in einem Mikromanipulator.
Positionieren Sie einen Agaroseblock unter dem Mikroskop und platzieren Sie einen in Agarose eingebetteten embryonalen Hirnschnitt der Maus mit kortikalen Interneuronen darüber.
Senken Sie die Mikropipette ab und injizieren Sie das DNA-Gemisch in die Vorläuferregion des Interneurons. Der Tracking-Farbstoff markiert die Injektionsstelle.
Positionieren Sie einen weiteren Agaroseblock auf einer Petrischalenelektrode und eine Agarosesäule auf der Deckelektrode.
Übertragen Sie die Scheibe auf den Block und richten Sie die Deckelektrode über der Injektionsstelle aus.
Wenden Sie kurze elektrische Impulse an, um die Zellmembranen vorübergehend zu permeabilisieren, so dass die Plasmide in den Zellkern eindringen können.
Inkubieren Sie die Scheibe in einem Medium, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu erhalten.
Im Zellkern löst das Plasmid die Genexpression aus, produziert das Zielprotein und moduliert die Vorläuferfunktionen der Interneuronen.
Für die Injektion mischen Sie die Expressions- und Kontrollvektor-DNA
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