JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:00 Min. • June 17th, 2025
Nehmen Sie ein chemisch fixiertes Maushirnschnitt in einer Multiwell-Platte.
Das Gewebe enthält Axone, die von lipidreichen Myelinscheiden umgeben sind. Die Zellkörper enthalten Nissl-Körperchen, die aus dem rauen endoplasmatischen Retikulum und Ribosomen bestehen.
Inkubieren Sie in einer Permeabilisierungslösung, die einen fluoreszierenden Nissl-Farbstoff enthält. Die Lösung permeabilisiert die Zellmembranen, so dass der Farbstoff an die ribosomale RNA in den Nissl-Körpern binden und die Zellkörper markieren kann.
Legen Sie das Gewebe unter ein konfokales Mikroskop mit einem kohärenten Anti-Stokes-Raman-Spektroskopie-System (CARS).
Direkt synchronisierte Pump- und Stokes-Laserstrahlen auf das Gewebe, die darauf abgestimmt sind, molekulare Bindungen in der lipidreichen Myelinscheide anzuregen.
Führen Sie einen Sondenlaserstrahl ein, um mit den angeregten Bindungen zu interagieren und ein Anti-Stokes-Signal zu erzeugen, das spezifisch für Myelin ist.
Ein Photodetektor fängt das Signal ein, um ein myelinspezifisches Bild zu erzeugen.
Verwenden Sie die konfokale Bildgebung, um Signale von den beschrifteten Nissl-Körpern zu erfassen.
Überlagern Sie die konfokalen und CARS-Bilder zur Visualisie
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