JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:18 Min. • June 17th, 2025
Nehmen wir eine gelähmte transgene Zebrafischlarve, die in einer Perfusionskammer sitzt.
Die Larve exprimiert membranlokalisierte Kalziumindikatoren in den Haarzellen des Neuromastes, einer Komponente des Seitenliniensystems, das Wasserbewegungen erkennt.
Die Haarzellen bestehen aus apikalen Haarbündeln und basalen präsynaptischen Regionen, die Synapsen mit afferenten Neuronen bilden, um Signale zu übertragen.
Positionieren Sie unter einem Konfokalmikroskop mit geringer Vergrößerung eine Flüssigkeitsstrahlpipette in der Nähe der Larve.
Erhöhen Sie die Vergrößerung, um einen Neuromast zu lokalisieren, positionieren Sie die Pipette in seiner Nähe neu und wechseln Sie zur
Fluoreszenzbildgebung.
Liefern Sie Flüssigkeitsimpulse, um Haarbündel abzulenken und Mechanotransduktionskanäle für den apikalen Kationenstrom, einschließlich Kalziumionen, zu öffnen.
Schwach fluoreszierende Indikatoren binden an Kalzium, was zu einem lokalen Anstieg der Fluoreszenz führt.
Der Kationeneinstrom depolarisiert die Zelle und löst den Kalziumeintritt durch spannungsgesteuerte Kanäle an der basalen Präsynapse aus, wo es an die Indikatoren bindet und die Fluoreszenz lokal erhöht.
Visualisieren Sie die apikale und ba
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