Formulierung eines Dopamin-beladenen Exosomen-Trägersystems

Beginnen Sie mit einem Röhrchen, das eine Suspension von Exosomen enthält, bei denen es sich um extrazelluläre Nanovesikel auf Lipidbasis handelt.

Geben Sie phosphatgepufferte Kochsalzlösung oder PBS in das Röhrchen, um eine gleichmäßige Exosomendispersion zu erhalten.

Aspirieren Sie die Exosomenlösung und filtern Sie sie mit einem Membranfilter, um Restverunreinigungen zu entfernen.

Übertragen Sie diese gefilterte Exosom-Suspension in ein frisches Röhrchen.

Fügen Sie der Exosom-Suspension eine Lösung hinzu, die Dopamin, ein Neurotherapeutikum, gefolgt von Saponin, einem Tensid, enthält.

Inkubieren Sie die Mischung bei physiologischer Temperatur, um die Durchlässigkeit der exosomalen Membran zu verbessern.

Saponin entfernt selektiv membrangebundene Cholesterin aus der Exosomenmembran und schafft Poren in den exosomalen Lipiddoppelschichten.

Dopamin diffundiert durch diese Poren in die Exosomen.

Im Laufe der Zeit verteilen sich die Lipide in der exosomalen Membran neu, und die Poren schließen sich, wodurch Dopamin in den Exosomen eingekapselt wird.

Als nächstes zentrifugieren Sie die Mischlösung, um die mit Dopamin beladenen Exosomen zu pelletieren.

Entfernen Sie den Überstand, der freies Dopamin und Saponin enthält.

Das Pellet mit den Dopamin-beladenen Exosomen ist bereit für weitere Studien.

Geben Sie 3 Milliliter PBS zu der zuvor durch Ultrazentrifugation gesammelten Exosomensuspension und sterilisieren Sie die verdünnte Suspension durch Filtration mit einem 0,22-Mikron-Filter.

Übertragen Sie dann 500 Mikroliter der sterilisierten Exosomensuspension in ein anderes Röhrchen.

Als nächstes fügen Sie nacheinander 500 Mikroliter 0,5 Milligramm pro Milliliter Dopaminlösung und Saponin in die sterilisierte Suspension hinzu. Nach der Inkubation die Suspension ultrazentrifugieren.