JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 2:41 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer anästhesierten Maus mit einem chirurgisch exponierten Schädel, der unter einem Fluoreszenzmakroskop positioniert ist.
Der Kopf wird mit einer Kopfplatte über dem Schädel stabilisiert, wodurch ein Schädelfenster entsteht.
Eine Kanüle, die einen fluoreszierenden Tracer enthält, wird in die Cisterna magna (CM) des Gehirns eingeführt.
Das CM dient als Reservoir für die Zerebrospinalflüssigkeit (CSF), die durch den Subarachnoidalraum zirkuliert, der das Gehirn umgibt.
Fokussieren Sie sich mit sichtbarem Licht auf den Schädel.
Injizieren Sie den Fluoreszenz-Tracer in das CM und wechseln Sie dann zur Fluoreszenzbildgebung.
Beleuchten Sie mit Licht einer bestimmten Wellenlänge, um den Tracer anzuregen.
Der Tracer absorbiert dieses Licht und sendet Fluoreszenzsignale aus.
Die fluoreszierenden Tracer wandern mit dem Liquor und ermöglichen die Visualisierung seines Flusses durch den Subarachnoidalraum in die perivaskulären Räume, die die Hirnarterien und die durchdringenden
Arteriolen umgeben, und gelangen in das Hirngewebe.
Erfassen Sie das Fluoreszenzsignal im Zeitverlauf, um den Liquorfluss zu visualisieren.
Platzieren Sie die Maus und die an der Kanüle befestigte Infusionspumpe vorsichtig auf einem Wagen für den Transport zum Makroskop und platzieren Sie die Kopfhalterung auf dem Tisch des Makroskops. Achten Sie darauf, dass die Leitung von der Spritzenpumpe zur Cisterna Magna Kanüle nicht gespannt ist und keine Knicke aufweist. Beobachten Sie die Atemfrequenz und die rosa Färbung der Schleimhäute, um eine gute Sauerstoffversorgung zu bestätigen.
Schalten Sie die Mikroskopkamera und die Leuchtdiode ein und starten Sie den Live-Modus. Passen Sie die Vergrößerung des Bildfeldes so an, dass die nasofrontale Naht am oberen Rand des Feldes und die Lambdoideus-Naht am unteren Rand deutlich sichtbar sind. Sobald der Kopfhalter an Ort und Stelle ist, kleben Sie ihn auf den Makroskoptisch und fokussieren Sie das Makroskop auf den freiliegenden Schädel, bis sich die Brennebene an den lateralen Seiten der Parietalknochen hinter den koronalen Nähten befindet.
Stellen Sie für die Liquor-Tracer-Infusion die Infusionspumpe auf die entsprechende Rate und das entsprechende Volumen ein und stellen Sie für jeden Kanal die entsprechende Anregungswellenlänge und Belichtungszeit für den Tracer ein. Überprüfen Sie dann, ob die Auslösefunktion am Makroskop korrekt ist, bevor Sie gleichzeitig die Tracerinfusion und die Bildgebung starten.