JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:33 Min. • June 17th, 2025
Nehmen Sie ein polymerbeschichtetes Deckglas, das eine Neuron-Astrozyten-Mischkultur in der Aufnahmekammer enthält.
Diese transfizierten Zellen exprimieren kalziumempfindliche Proteine auf den Plasma- und ER-Membranen, die bei Kalziumbindung fluoreszieren, um die subzelluläre Kalziumdynamik zu verfolgen.
Fügen Sie Medien hinzu, die Kalziumionen enthalten, und decken Sie die Kammer ab, um eine Verdunstung zu verhindern.
Stellen Sie die Kammer unter ein Fluoreszenzmikroskop.
Calcium-Ionen binden an calciumempfindliche Proteine. Bei Bestrahlung mit blauem Licht fluoreszieren die kalziumempfindlichen Proteine auf der ER-Außenmembran grün. Verwenden Sie diese grüne Fluoreszenz, um Astrozyten zu lokalisieren.
Bestrahlen Sie anschließend mit grünem Licht. Die kalziumempfindlichen Proteine auf der Plasmamembran fluoreszieren rot. Bestätigen Sie das Vorhandensein von roter Fluoreszenz in demselben Astrozyten, der grüne Fluoreszenz aufweist.
Nehmen Sie Zeitrafferbilder von kalziumempfindlichen Proteinen auf der Plasmamembran auf, gefolgt von den kalziumempfindlichen Proteinen auf der ER-Außenmembran.
Analysieren Sie die Bilder, um die kompartimentspezifische spontane Kalziumaktivität in den ausgewä
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