Name: Heterotypische Dreidimensionale In Vitro Modellierung von Stromal-Epithelial Interaktionen beim Eierstockkrebs Initiation und Progression (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Erfahren Sie die Erstellung heterotypischer 3D-Kulturen zur Untersuchung stromal-epithelialer Interaktionen beim Eierstockkrebs. Diese Methode ermöglicht die Analyse früher Tumorentwicklung und Mikroumgebungseinflüsse.

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Diese Arbeit wurde an der Keck School of Medicine, University of California, USA, und am University College London, UK durchgeführt. KL wird von National Institute of Health Gewährung 5 U19 CA148112-02 finanziert. BG wurde von einer Projektgruppe Zuschuss aus dem Eve Appeal gynäkologische Onkologie Charity (UK) finanziert. Einige dieser Arbeiten am UCLH / UCL durchgeführt wurde teilweise Finanzierung aus dem Department of Health NIHR Biomedical Research Centre Förderprogramm.

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<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die Biologie der Early-Stage-epithelialen Ovarialkarzinom (EOC) ist wenig bekannt. Vielleicht eines der Haupthindernisse in diesem Bereich seit vielen Jahren war der Mangel an Verständnis für die Gewebe-spezifische Ursachen der Krankheit und die Bedeutung der Rolle der Mikroumgebung in EOC Entwicklung. In den letzten Jahren hat sich herausgestellt, dass sich EOC eine heterogene Erkrankung mit mehreren unterschiedlichen Subtypen histopathologischen, wahrscheinlich mit verschiedenen zellulären Ursprung für verschiedene Su...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Lieferant </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, geeignet für die Zellkultur </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Molekularbiologie Ethanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Sterilem Wasser für die Zellkultur </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone Fötales Rinderserum </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-Hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% Trypsin-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Zellsieb (40 oder 70 m) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-Fibroblasten Oberflächenprotein Antikörper, Klon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-Zytokeratin Antikörper (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (Hexadimethrinbromid) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomere Länge Assay </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Reagenzien und Geräte im Sinne dieser Studie.

heterotypische dreidimensionale<em&gt; in vitro</em&gt; modellierung von stromal-epithelial interaktionen beim eierstockkrebs initiation und progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelialen Eierstockkrebs (EOC) sind die häufigste Todesursache bei gynäkologischen Malignomen in westlichen Gesellschaften. Trotz der Fortschritte in der chirurgischen Behandlungen und verbesserten Platin-basierten Chemotherapie, hat es wenig Verbesserung EOC Überlebensraten für mehr als vier Jahrzehnten 1,2. Während im Stadium I Tumoren haben 5-Jahres-Überlebensraten&gt; 85%, sind die Überlebensraten für Stufe III / IV der Krankheit &lt;40%. So konnten die hohen Sterblichkeitsraten für EOC deutlich verringert werden, wenn die Tumore bei früheren, mehr behandelbar, Stufen 3-5 nachgewiesen wurden. Derzeit wird die molekulare genetische und biologische Grundlage der frühen Stadium der Erkrankung die Entwicklung nur unzureichend verstanden. Genauer gesagt, ist nur wenig über die Rolle der Mikroumgebung während Tumorinitiation bekannt, aber bekannten Risikofaktoren für EOC (zB Alter und Parität) legen nahe, dass die Mikroumgebung eine zentrale Rolle spielt in der frühen Entstehung der EOC. Wir entwickelten deshalb dreidimensionale heterotypische Modellesowohl der normalen Ovar und frühzeitig Eierstockkrebs. Für den normalen Ovar, wir co-kultivierten normalen Ovarien Oberflächenepithelzellen (IOSE) und normalen Stromazellen Fibroblasten (Inof) Zellen durch Transduktion retrovrial der katalytischen Untereinheit der humanen Telomerase Holoenzym (hTERT), um die Lebensdauer dieser Zellen in Kultur immortalisierten erstrecken. Um die frühesten Stadien der Ovarialepithelzellen Zelltransformation Überexpression des CMYC Onkogen in IOSE Zellen, wieder mit Inof Zellen co-kultiviert modellieren. Diese heterotypische Modelle wurden verwendet, um die Auswirkungen des Alterns und der Seneszenz der Transformation und Invasion von Epithelzellen zu untersuchen. Hier beschreiben wir die methodischen Schritte Entwicklung dieser dreidimensionalen Modells; diese Methoden sind nicht spezifisch für die Entwicklung einer normalen Ovar und Eierstockkrebs Geweben und könnte verwendet werden, um andere Gewebearten zu untersuchen, wo stromalen und epithelialen Zell-Wechselwirkungen sind ein grundlegendes Aspekt des Gewebes Wartung und diSease Entwicklung.

Wir beschreiben Methoden zur Gründung<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypische dreidimensionalen Modellen, umfassend ovariellen normalen Fibroblasten und Eierstock Oberfläche oder Eierstockkrebs Epithelzellen. Wir diskutieren den Einsatz dieser Modelle Stroma-Epithel-Interaktionen, die während Eierstockkrebs Entwicklung auftreten studieren.

Heterotypische Dreidimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellierung von Stromal-Epithelial Interaktionen beim Eierstockkrebs Initiation und Progression

Epitheliale Ovarialkarzinome (EOCs) sind die häufigste Todesursache aufgrund gynäkologischer Malignome in westlichen Gesellschaften. Trotz Fortschritten in der chirurgischen ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, dreidimensionale typische Modelle der frühen Ovarialkarzinomentwicklung zu erzeugen. Erzeugen Sie zunächst H turt-immortalisierte Zelllinien, die aus primären, normalen ovariellen Epithel- und Fibroblastengeweben stammen. Anschließend werden die in vivo vorhandene Architektur sowie die komplexen Zell-Zell-Interaktionen im Eierstock durch eine Kokultur von epithelialen und stromalen Zelllinien in dreidimensionalen S-Sphäroidmodellen nachgebildet. Danach werden die Organoidkulturen fixiert und gefärbt, um die Expression spezifischer Marker zu analysieren und molekulare Merkmale der Strom-Epithel-Interaktionen zu untersuchen.Die erhaltenen Ergebnisse zeigen, wie Veränderungen im stromalen Zellkompartiment dreidimensionaler typischer Modelle den Phänotyp ko-kultivierter epithelialer Zellen beeinflussen können. Dreidimensionale typische Modelle können dazu beitragen, zentrale Fragen im Bereich der Ovarialkarzinom-Forschung zu beantworten, beispielsweise die Erforschung der Entstehungsursachen dieser Erkrankung sowie die Aufklärung der Rolle der stromalen Mikroumgebung bei der Tumorentstehung und -entwicklung. Die Anwendung

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die Mesothelzellen-Clearance-Test hier beschriebenen nutzt die Vorteile der fluoreszenzmarkierten Zellen und Zeitraffer-Video-Mikroskopie zu visualisieren und quantitativ zu messen die Wechselwirkungen von Eierstockkrebs mehrzelligen Sphäroiden und Mesothelzelle Monoschichten. Dieser Test modelliert die frühen Schritte der Metastasierung Eierstockkrebs.

In-vitro-Assay Mesothelzellen Ausverkauf, dass die Modelle der frühen Schritte der Metastasierung Eierstockkrebs

In diesem Video demonstrieren wir die Entwicklung eines in vitro dreidimensionalen Modells der Auskleidung der Bauchhöhle. Diese organotypische Kultur kann helfen, die Adhäsion, Invasion und Proliferation von Eierstockkrebszellen zu untersuchen.

Modellierung der Metastasierung von Eierstockkrebs in der Peritonealhöhle: Eine Methode zur Erstellung eines In-vitro-3D-Modells der Peritonealschleimhaut

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Co-Kultur in drei Dimensionen, das nützlich ist, um multizelluläre Interaktionen und extrazelluläre Matrix-abhängige Modulation des Verhaltens von Krebszellen zu untersuchen. In diesem experimentellen Modell werden Krebszellen auf Kollagengelen kultiviert, die in humane krebsassoziierte Fibroblasten eingebettet sind.

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Konstruktion eines dreidimensionalen in vitro Modells der Auskleidung der Bauchhöhle, bestehend aus primären menschlichen Mesothelzellen und Fibroblasten, die mit extrazellulärer Matrix überlagert sind, als Werkzeug zur Untersuchung der Adhäsion, Invasion und Proliferation von Eierstockkrebszellen.

Modellierung der frühen Schritte der Eierstockkrebs Verbreitung in einer organotypischen Kultur der Menschen Peritonealhöhle

Wir demonstrieren eine Methode zur Erzeugung von 3D-Brustkrebs-Surrogaten, die mit einem Perfusionsbioreaktorsystem kultiviert werden können, um Sauerstoff und Nährstoffe zu liefern. Nach dem Wachstum werden Surrogate fixiert und zu Paraffin verarbeitet, um die interessierenden Parameter zu bewerten. Die Auswertung eines solchen Parameters, der Zelldichte, wird erläutert.

Herstellung und Analyse von<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional Mammakarzinoms Surrogates

ovarian Tumorprogression in einem physiologisch relevanten Modell, mehrzelligen Sphäroiden wurden in einem Mikroeinrichtung unter simulierten Fluidstrom zu studieren. Diese dynamische 3D-Modell emuliert die intraperitoneale Umgebung mit den zellulären und mechanischen Komponenten, bei denen Ovarialkarzinom Metastasen auftreten.

Modellierung Ovarian Cancer Vielzellige Sphäroid-Verhalten in einer dynamischen 3D-Peritoneal Microdevice

Eierstockkrebs-Stammzellen (OCSC) sind verantwortlich für Krebsentstehung, Rezidiv, therapeutische Resistenz und Metastasen. Es wird angenommen, dass die OCSC-Gefäßnische die Selbsterneuerung von OCSCs fördert, was zu Chemoresistenz führt. Dieses Protokoll bildet die Grundlage für die Etablierung eines reproduzierbaren OCSC-Gefäßnischenmodells in vitro.

Bewertung der angiogenetischen Eigenschaften von Stammzellen von Eierstockkrebs mit dem dreidimensionalen Kokultursystem NICO-1

Dieses Protokoll beschreibt die Etablierung eines dreidimensionalen (3D) ex vivo Modells der Krebszell-Omentum-Interaktion. Das Modell bietet eine Plattform zur Aufklärung von Pro-Tumor-Mechanismen in der Fettnische und zur Erprobung neuartiger Therapien.

Ein Ex-vivo-Modell der Peritonealmetastasierung von Eierstockkrebs mit humanem Omentum

Es besteht ein dringender Bedarf an 3D-Krebsmodellen, die heterozelluläre Wechselwirkungen erfassen, um Krebsmetastasen zu untersuchen. Unsere Studie stellt die Erzeugung von heteromultizellulären Stroma-Epithel-Epithelen in einer gerüstfreien und gerüstfreien Umgebung vor, die zur Untersuchung der Invasion und der zellulären räumlichen Verteilungen verwendet werden kann.

Heteromultizelluläre Stromazellen in gerüstfreien 3D-Kulturen von Epithelkarzinomzellen treiben die Invasion voran

Dieses Protokoll beschreibt die Entwicklung von hochgradigen serösen Ovarialkarzinom-Mausmodellen (HGSOC) in vitro und in vivo. Von der Gewinnung von murinen Eileiter-Organoiden über ihre genetische Modifikation zur Rekapitulation der menschlichen HGSOC-Genetik bis hin zu ihrer Einführung in den Eierstockschleimbeutel syngener Mäuse für die in vivo-Entwicklung von Tumoren.

Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms

Erfahren Sie die Erstellung heterotypischer 3D-Kulturen zur Untersuchung stromal-epithelialer Interaktionen beim Eierstockkrebs. Diese Methode ermöglicht die Analyse früher Tumorentwicklung und Mikroumgebungseinflüsse.

Heterotypische Dreidimensionale In Vitro Modellierung von Stromal-Epithelial Interaktionen beim Eierstockkrebs Initiation und Progression (Video) | JoVE Journal

Heterotypische Dreidimensionale

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