Orthotopen Mausmodell der Darmkrebs-

Zwei Techniken können verwendet werden, um dieses Modell zu etablieren werden: Injektion einer Krebszelle Suspension in den Blinddarm Wand oder Transplantation von einem Stück des subkutanen Tumor auf den Blinddarm. Dieses Modell ist nützlich für die Untersuchung der natürlichen Entwicklung von Darmkrebs und Erprobung neuer Therapeutika gegen den Darmkrebs.

Hallo, mein Name ist William Sang. Ich komme aus dem Labor von Dr. Edgar Engelman in der Abteilung für Pathologie der Stanford University. Ich bin auch Assistenzarzt für Chirurgie an der University of California San Francisco.

Heute zeige ich Ihnen, wie Sie ein orthotopes Mausmodell für Darmkrebs etablieren können. Dieses Modell ist nützlich, um den natürlichen Verlauf von Darmkrebs zu untersuchen und neue Therapeutika gegen Darmkrebs zu testen. Dies steht im Gegensatz zum traditionellen Modell des subkutanen Tumors.

Das subkutane Tumormodell ist insofern nicht ideal, als Tumorzellen, die unter der Haut wachsen, einen veränderten Phänotyp aufweisen und häufig nicht fortschreiten und Metastasen bilden. Tatsächlich kann das Ansprechen des Tumors auf die Therapie stark variieren, je nachdem, ob die Tumorzellen an einer subkutanen oder an einer orthotopen Stelle implantiert werden. Zwei Techniken können verwendet werden, um ein orthotopes Mausmodell für Darmkrebs zu etablieren.

Eine Technik beinhaltet die Injektion einer Suspension von Darmkrebszellen in die SQL-Wand. Bei der anderen Technik wird ein Stück subkutaner Tumor auf Blinddarm transplantiert. Beide Techniken sind ähnlich und beinhalten die folgenden Schritte, eine, Zell- oder Tumorpräparation.

Zwei, Mauspräparation, Laparotomie und Freilegung des Blindfußes. Drei Injektionen von Zellen oder Transplantation von Tumoren und vier Mäuse Bauchwandverschluss und Genesung. Fangen wir an.

Für das heutige Verfahren haben wir also eine Reihe verschiedener Instrumente, die wir verwenden. Dies sind eine Pinzette, eine Schere, ein normaler Nadelhalter, ein Castro Viejo ne Nadelhalter. Und wichtig für das Verfahren ist, dass wir ein vorgeschnittenes Stück sterile Gaze haben.

Darmkrebszellen werden in Kultur gezüchtet und geerntet, wenn subkonfluent, wird eine Einzelzellsuspension in phosphatgepufferter Kochsalzlösung hergestellt und auf Eis aufbewahrt. Eine Bosheit mit einem zuvor angelegten subkutanen kolorektalen Tumor wird euthanasiert. Der subkutane Tumor wird in steriler Technik entnommen und in zwei bis drei Millimeter große Stücke geteilt.

Die Tumorstücke werden in phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf Eis aufbewahrt. In unserem Labor verwenden wir ein Inhalationsanästhetikum aus Fluor. Alternativ kann man injizierbare Anästhetika verwenden, um den gleichen Effekt zu erzielen.

Die Tiefe der Anästhesie wird mit Hilfe des Zehenkneifens beurteilt. Es sollte keinen Rückzugsreflex beim Einklemmen der Zehen geben. Zu diesem Zeitpunkt können Antibiotika verabreicht werden.

Die betäubte Maus, die zuvor rasiert wurde, wird richtig positioniert. Der Bauch wird dreimal mit Betadine-Lösung vorbereitet, dann werden der Bauch und das Operationsfeld steril drapiert. Es wird eine kleine Kerbe in die Haut gemacht.

Die Bauchwandmuskulatur wird transplantiert und angehoben. Die Bauchhöhle wird verletzt und mit einer einzigen Klinge der Schere wird der intraabdominale Inhalt weggeschoben. Der Schnitt wird auf zwei bis drei Zentimeter verlängert.

Das Secum mit seinem Sack mit seinem Sack wird identifiziert und nach außen geführt. Das Secum ist vom Rest der Maus isoliert. Mit einer vorgeschnittenen sterilen Gaze wird warme Kochsalzlösung verwendet, um den Blinddarm feucht zu halten.

Eine 27 Gauge oder feinere Nadel wird verwendet, um ein Volumen von 50 Mikrolitern Zellen in die SQL-Wand zu injizieren. Die Nadel wird entfernt. Die Injektionsstelle wird inspiziert, um sicherzustellen, dass keine Leckage auftritt. Neben der Injektion von Zellen in die SQL-Wand besteht ein alternativer Ansatz darin, den Tumor auf den Blinddarm zu transplantieren.

Ein Achtstich wird mit einer Naht der Größe sechs oder sieben oh auf den Blinddarm gelegt. Die seco-Wand ist leicht beschädigt. Dann wird das Tumorstück richtig positioniert.

Der Stich wird festgebunden. Das Secum wird in die Bauchhöhle zurückgeführt. Die Bauchdecke der Maus wird mit drei unterbrochenen Nähten mit drei oder vier oh Nähten geschlossen.

Alternativ kann man einen einfachen Laufstich verwenden, postoperative Analgetika und einen flüssigen Bolus verabreichen. Zu diesem Zeitpunkt darf sich die Maus von der Narkose mit Inhalationsanästhetika erholen. Die Maus erholt sich in der Regel innerhalb von 30 Sekunden von der Narkose.

Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie Sie ein orthotopes Mausmodell für Darmkrebs etablieren können. Die Zeit bis zur Entwicklung von Primärtumoren und Lebermetastasen hängt von der verwendeten Technik, der verwendeten Zelllinie und der verwendeten Mausspezies ab. Dieses Modell ist nützlich, um das natürliche Fortschreiten von Darmkrebs zu untersuchen und neue Therapien gegen Darmkrebs zu testen.

Das war's also. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Glück bei Ihren Experimenten.