Name: Orthotopen Mausmodell der Darmkrebs- (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Lernen Sie die Etablierung eines orthotopen Mausmodells des Kolorektalen Karzinoms. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung des natürlichen Tumorverlaufs und das Testen neuer Therapeutika in vivo.

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Department of Surgery, University of California, San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. Cell Preparation <ol><li> Darmkrebs-Zellen in Kultur gezüchtet und geerntet werden, wenn subkonfluenten. </li><li> Eine einzelne Zelle Suspension wird in Phosphat-gepufferter Saline und auf Eis gehalten. </li></ol> II. Tumor Vorbereitung <ol><li> Eine Maus mit einem vorher festgelegten subkutane kolorektalen Tumor eingeschläfert. </li><li> Die subkutane Tumor wird entfernt, indem sterile Technik und in 2-3 mm Stücke geteilt </li><li> Der Tumor Stücke sind in Phosphat gehalten Kochsalzlösung auf Eis. </li></ol> III. Maus Vorbereitung Hinweis: In unserem Labor verwenden wir eingeatmet Isofluran, um die Maus zu betäuben, alternativ kann man Injektionsnarkosemittel verwenden, um denselben Effekt zu erzielen <ol><li> Die Narkosetiefe wird anhand Zehen klemmen. Es sollte keine zurückzutreten Reflex mit Zehen klemmen. </li><li> Antibiotika können an dieser Stelle gegeben werden. </li><li> Die narkotisierten Maus, die vorher rasiert wurde, richtig positioniert ist. </li><li> Der Bauch ist mit einem betadine Lösung vorbereitet. </li><li> Die Bauch-und OP-Gebiet sind in einer sterilen Mode drapiert. </li></ol> IV. Laparotomie <ol><li> Eine kleine Nick ist in die Haut gemacht </li><li> Die Bauchwandmuskulatur begriffen und hob </li><li> Die Bauchhöhle wird eingegeben und ein einziges Blatt der Schere wird verwendet, um die intra-abdominale Inhalte wegschieben </li><li> Der Schnitt wird um 2-3 cm verlängert </li></ol> V. Exposure des Blinddarms <ol><li> Der Blinddarm mit seinen blind endende Tasche identifiziert und exteriorisierten </li><li> Der Blinddarm ist vom Rest der Maus über einen pre-cut, sterile Gaze isoliert </li><li> Warm Kochsalzlösung wird verwendet, um den Blinddarm feucht zu halten </li></ol> VI. Injektion von Zellen in den Blinddarm Wand <ol><li> A 27 G oder feiner Nadel wird benutzt, um eine 50 ul Volumen von Zellen in den Blinddarm Wand spritzen </li><li> Die Nadel wird entfernt </li><li> Die Einstichstelle wird überprüft, um sicherzustellen, keine Leckage </li><li> Der Blinddarm ist es, die Bauchhöhle zurück </li></ol> VII. Die Transplantation von Tumor auf den Blinddarm Hinweis: Zusätzlich zu injizieren Zellen in den Blinddarm Wand, ist ein alternativer Ansatz zur Tumor auf den Blinddarm Transplantation <ol><li> Eine Figur von 8 Stich ist auf den Blinddarm mit 6-0 oder 7-0 große Naht gelegt </li><li> Der Blinddarm Wand ist leicht beschädigt </li><li> Dann wird der Tumor Stück positioniert </li><li> Der Stich ist festgebunden </li><li> Der Blinddarm ist es, die Bauchhöhle zurück </li></ol> VIII. Maus Bauchwand Closure and Recovery <ol><li> Die Maus Bauchdecke geschlossen ist mit drei Stichen unterbrochen mit 3-0 oder 4-0 große Naht </li><li> Alternativ kann man mit einem einfachen Laufstich </li><li> Postoperative Schmerzmittel und ein Flüssigkeitsbolus kann an dieser Stelle gegeben werden </li><li> Die Maus ist erlaubt, aus der Narkose zu erholen. </li></ol> Hinweis: Bei Inhalationsanästhetika dies in der Regel dauert 30 Sekunden IX. Ergebnisse - Primärtumor und Lebermetastasen <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Primary Tumor - in situ gezeigt (A) und mit dem Nachweis der Gefäßneubildung (B), auf H &amp; E-Färbung, sind Tumoren lokal invasive (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> Lebermetastasen - gezeigt, ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Obwohl Maus subkutanen Tumor-Modellen leicht festzustellen und zu überwachen sind, ist es klar, dass dieses Modell nicht replizieren kann die ursprüngliche anatomische Stelle von Darmkrebs. Aufgrund der Differenz in Mikroumgebung haben kolorektalen Krebszellen wachsen unter der Haut gezeigt, ihren Phänotyp zu ändern und fast immer keine Fortschritte und metastasieren 1,2. In der Tat können Ansprechen des Tumors auf die Therapie erheblich variieren je nachdem, ob Krebszellen in einer Eileiterschwangerschaft (subkutan) versus ortho...

<table><tbody><tr><td>Zellkulturmedien und Bestandteile</td><td></td><td></td><td>je nach verwendeter Zelllinie unterschiedlich</td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>wird auch von einer Reihe anderer Anbieter angeboten</td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen, 15 mL, aus Polypropylen</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>6-Loch-Platten mit Deckel</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette, gerade, mit gezackten Spitzen</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>es ist ratsam, ein Paar dieser Instrumente zu besitzen</td></tr><tr><td>Dissektions-Scheren, gerade, scharf</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter (normal)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>Instrumente sollten periodisch autoklaviert werden, können aber auch durch Einweichen in Cidex sterilisiert werden</td></tr><tr><td>6-0- oder 7-0-Nahtmaterial</td><td></td><td></td><td>für den Blinddarm; mit freundlicher Genehmigung der Abteilung für Chirurgie, UCSF</td></tr><tr><td>3-0- oder 4-0-Nahtmaterial</td><td></td><td></td><td>für die Bauchwand; mit freundlicher Genehmigung der Abteilung für Chirurgie, UCSF</td></tr><tr><td>Analysator / Isofluran</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>wird auch von einer Reihe anderer Anbieter angeboten</td></tr><tr><td>Einweg-Heizkissen, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Klebeband, orange, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>zur Fixierung der anästhesierten Maus</td></tr><tr><td>Pro-Cord/Cordless-Trimmer</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>zum Rasieren des Mausfells</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>kann auch in jedem medizinischen Fachhandel erworben werden</td></tr><tr><td>Kompressen, 2 x 2 Zoll, 3-lagig</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>kann auch in jedem medizinischen Fachhandel erworben werden</td></tr><tr><td>Steriles Feld, Barriere, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>kann auch in jedem medizinischen Fachhandel erworben werden</td></tr><tr><td>Wattestäbchen, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>kann auch in jedem medizinischen Fachhandel erworben werden</td></tr><tr><td>Spritze, 10 cm³, mit Luer-Lock-Spitze</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Spritze, 1 cm³, Tuberkulin, mit Gleitverschluss</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27 1/2 G Nadel</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>30 G Nadel</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopen mausmodell der darmkrebs-

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Die traditionellen subkutanen Tumor-Modell ist weniger als ideal für das Studium des kolorektalen Karzinoms. Orthotopen Mausmodell des kolorektalen Karzinoms, die Krebszellen wachsen in ihrem natürlichen Standort-Funktion, replizieren menschlichen Krankheiten mit hoher Wiedergabetreue. Zwei Techniken können verwendet werden, um dieses Modell zu etablieren. Beide Techniken sind ähnlich und erfordern Maus Anästhesie und Laparotomie für die Exposition des Blinddarms. Eine besteht darin, Injektion eines kolorektalen Karzinoms Zellsuspension in den Blinddarm Wand. Krebszellen werden zuerst in Kultur angebaut, geerntet, wenn subkonfluenten und hergestellt, wie eine einzelne Zelle Suspension. Ein kleines Volumen der Zellen wird langsam, um ein Auslaufen zu vermeiden injiziert. Die andere Technik beinhaltet die Transplantation von einem Stück des subkutanen Tumor auf den Blinddarm. Eine Maus mit einem vorher festgelegten subkutane kolorektalen Tumor eingeschläfert und der Tumor wird entfernt, indem sterile Technik. Der Tumor Stück ist in kleine Stücke für die Transplantation zu einem anderen Maus unterteilt. Vor der Transplantation wird der Blinddarm Wand leicht beschädigt, um Tumor-Zell-Infiltration zu erleichtern. Die Zeit bis zur Entwicklung von Primärtumoren und Lebermetastasen hängt von der Technik-, Zell-Linie, und die Maus Arten verwendet. Diese orthotopen Mausmodell ist nützlich für die Untersuchung der natürlichen Entwicklung von Darmkrebs und Erprobung neuer Therapeutika gegen den Darmkrebs.

Zwei Techniken können verwendet werden, um dieses Modell zu etablieren werden: Injektion einer Krebszelle Suspension in den Blinddarm Wand oder Transplantation von einem Stück des subkutanen Tumor auf den Blinddarm. Dieses Modell ist nützlich für die Untersuchung der natürlichen Entwicklung von Darmkrebs und Erprobung neuer Therapeutika gegen den Darmkrebs.

Orthotopen Mausmodell der Darmkrebs-

Das traditionelle subkutane Tumormodell ist für die Untersuchung von kolorektalem Karzinom weniger als ideal. Orthotope Mausmodelle für das kolorektale Karzinom, die sich durch ... auszeichnen

Hallo, mein Name ist William Sang. Ich komme aus dem Labor von Dr. Edgar Engelman aus der Pathologieabteilung der Stanford University. Außerdem bin ich Assistenzarzt für Chirurgie an der University of California San Francisco.Heute zeige ich Ihnen, wie man ein orthotopes Mausmodell für kolorektales Karzinom etabliert. Dieses Modell eignet sich zur Untersuchung des natürlichen Verlaufs des kolorektalen Karzinoms und zum Testen neuer therapeutischer Wirkstoffe gegen kolorektales Karzinom. Dies steht im Gegensatz zum herkömmlichen subkutanen Tumormodell.Das subkutane Tumormodell ist weniger ideal, da Tumorzellen, die unter der Haut wachsen, häufig einen veränderten Phänotyp aufweisen und oft nicht fortschreiten oder metastasieren. Tatsächlich kann die Tumorreaktion auf eine Therapie stark variieren, je nachdem, ob die Tumorzellen subkutan oder orthotop implantiert werden. Zur Erstellung eines orthotopen Mausmodells für kolorektales Karzinom können zwei Techniken angewendet werden.Eine Technik beinhaltet die Injektion einer Suspension von Darmkrebszellen in die SQL-Wand. Die andere Technik beinhaltet die Transplantation eines Stückes subkutanen Tumors auf den Blinddarm. Beide Techniken sind ähnlich und umfassen die folgenden Schritte: erster Schritt, Zell- oder Tumorzubereitung.Zwei, Vorbereitung der Maus, Laparotomie und Freilegung des Zäkums. Drei, Injektion von Zellen oder Transplantation des Tumors, und vier, Verschluss der Bauchdecke der Maus und Erholungsphase. Beginnen wir.Für das heutige Verfahren verwenden wir eine Reihe unterschiedlicher Instrumente. Dies sind Pinzetten, eine Schere, einen normalen Nadelhalter und einen Castro-Viejo-Nadelhalter. Wichtig für das Verfahren ist außerdem ein vorgeschnittenes Stück steriler Gaze.Darmkrebszellen des Kolons und Rektums werden in Kultur gezüchtet und geerntet, wenn sie subkonfluent sind; eine Einzelzell-Suspension wird in phosphatgepufferter Kochsalzlösung hergestellt und auf Eis gehalten. Eine Maus mit einem zuvor etablierten subkutanen Kolorektaltumor wird euthanasiert. Der subkutane Tumor wird unter sterilen Bedingungen entfernt und in zwei bis drei Millimeter große Stücke zerteilt.Die Tumorproben werden in phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf Eis aufbewahrt. In unserem Labor verwenden wir ein inhalatives Anästhetikum, Isofluran. Alternativ können injizierbare Anästhetika verwendet werden, um dieselbe Wirkung zu erzielen.Die Tiefe der Anästhesie wird mittels Zehenquetschung beurteilt. Bei einer Zehenquetschung sollte kein Withdrawal-Reflex auftreten. Antibiotika können zu diesem Zeitpunkt verabreicht werden.Die anästhetisierte Maus, die zuvor rasiert wurde, wird korrekt positioniert. Der Bauch wird dreimal mit Betadine-Lösung präpariert und anschließend der Bauch sowie die Operationsstelle sterilerweise abgedeckt. Ein kleiner Schnitt wird in die Haut gemacht.Die Bauchwandmuskulatur wird abgehoben und angehoben. Die Bauchhöhle wird verletzt, und eine Scherenklinge wird verwendet, um die intraabdominalen Inhalte wegzuschieben. Der Einschnitt wird auf zwei bis drei Zentimeter verlängert.Das Zäkum mit seinem blind endenden Sack wird identifiziert und exteriorisiert. Das Zäkum wird vom übrigen Mausorganismus isoliert. Unter Verwendung eines vorgeschnittenen sterilen Gazetuchs wird warme Kochsalzlösung verwendet, um das Zäkum feucht zu halten.Eine Nadel mit einer Größe von 27 Gauge oder feiner wird verwendet, um ein Zellvolumen von 50 Mikrolitern in die SQL-Wand einzuspritzen. Die Nadel wird entfernt. Die Injektionsstelle wird überprüft, um sicherzustellen, dass kein Austritt erfolgt. Zusätzlich zur Injektion von Zellen in die SQL-Wand ist ein alternativer Ansatz, das Tumor auf dem Zäkum zu transplantieren.Ein Achtfachstich wird mit einer Naht der Größe sechs oder sieben am Z盲kum angebracht. Die Wand des Sekund盲rteils wird leicht besch盲digt. Anschlie脽end wird das Tumorst眉ck korrekt positioniert.Die Naht wird fixiert. Das Sekum wird in die Bauchhöhle zurückverlagert. Die Bauchdecke der Maus wird mit drei Einzelknopfnähten mit einer 3-0- oder 4-0-Naht geschlossen.Alternativ kann ein einfacher Laufstich verwendet werden, postoperative Analgetika und eine Flüssigkeitsbolusgabe können verabreicht werden. Zu diesem Zeitpunkt darf die Maus sich von der Anästhesie mit inhalativen Anästhetika erholen. Die Maus erholt sich typischerweise innerhalb von 30 Sekunden von der Anästhesie.Ich habe Ihnen soeben gezeigt, wie man ein orthotopes Mausmodell für Darmkrebs etabliert. Die Zeitspanne bis zur Entwicklung von Primärtumoren und Lebermetastasen hängt von der verwendeten Technik, der Zelllinie und der Mausart ab. Dieses Modell eignet sich zur Untersuchung des natürlichen Fortschreitens von Darmkrebs sowie zur Testung neuer Therapien gegen Darmkrebs.Das war's. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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Research

Forschung

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Biology

Biologie

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