Name: Ein orthotopen Mausmodell des Anaplastic Schilddrüsenkarzinom (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Lernen Sie die chirurgische Platzierung von anaplastischen Schilddrüsenkarzinomzellen in die Schilddrüse immundefizienter Mäuse. Diese orthotope Xenotransplantation ermöglicht realistische Studien zur Tumorprogression und Therapieentwicklung.

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Die Autoren bedanken sich bei Dr. danken. Wenjun Li und Daniel Kreisel (Washington University School of Medicine in St. Louis) für ihre Unterstützung in der Chirurgie Ausbildung. RYL wird durch die National Institutes of Health Grants R01 DK068057 und der Präsident der Forschungsfonds von Saint Louis University unterstützt.

Ein. Zellpräparation Anmerkungen: 1) vollständige RPMI 1640 basierten Kulturmedien Rezept (500 ml) enthält 435 ml RPMI 1640, 50 ml hitzeinaktiviertes FBS, 5 ml nicht-essentiellen Aminosäuren, 5 ml Natriumpyruvat, 5 ml Antibiotikum-Antimykotikum, 2) Ort Matrigel bei 4 ° C einen Tag vor der Zellernte. <ol><li> Menschliche ATC Zelllinie THJ-11T 8 sind in 6-Well-Platten Kultur angebaut und geerntet einmal 80-90% konfluent. </li><li> Pellet-Zellen durch Zentrifugation bei 200 × g für 4 min bei Raumtemperatur. </li><li> Saugen Medien und Zellen in RPMI 1640-Medium [2 ml / 6-Well-Platte]. </li><li> Nehmen Sie ein kleines Volumen der Zellsuspension, fügen Sie es zu einem Volumen von 0,4% Trypanblau und bestimmen Zelldichte mit TC10 Automated Zellzähler. </li><li> Berechnen Sie Volumen der Zellsuspension benötigt bis 5 x 10 5 Zellen / Maus mal die Anzahl Mäuse injiziert bekommen. </li></ol> Hinweis: Um sicherzustellen, ad<html> gleichzusetzen Zellsuspension zur Injektion vorzubereiten Zellen, als ob Sie injizieren die doppelte Anzahl von Mäusen (zB wenn Einspritzen 5 Mäuse, dann bereiten Zellsuspension, als ob Sie Injektion wurden 10 Mäuse) werden. <ol start="6"><li> Übertragen benötigt Volumen der Zellsuspension in einem 15 ml konischen Röhrchen. </li><li> Pellet-Zellen durch Zentrifugation bei 200 × g für 4 min bei Raumtemperatur. </li><li> Saugen Medien und Zellen in kompletten RPMI 1640 Medien. </li><li> Übertragen Zellen zu einer 1,6-ml-Röhrchen, fügen Sie 1 Volumen von Matrigel und vorsichtig mischen durch Pipettieren langsam ein und aus. </li></ol> Hinweis: Jede Maus wird 10 ul der Zellsuspension / Matrigel Cocktail empfangen. Seit 5 x 10 5 Zellen in einer 10 ul injizierbaren Volumen suspendiert wurden erfolgreich in früheren Studien ATC orthotopic 9-10 verwendet, nutzten wir die Parameter in diesem Bericht. <ol start="10"><li> Zeigen Zellsuspension auf Eis bis zum Gebrauch. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. Vorbereitung Maus <ol><li> Reinigen Sie den chirurgischen Bereich, der die Binokular und Umgebung, durch Wischen Sie alle Oberflächen mit 70% Ethanol enthält. </li><li> Schalten Sie Wärmelampen / pads, in denen Tiere von der Operation erholt werden. </li><li> Verwalten 0,1 ml Ketamin / Xylazin (Drogen-Cocktail, bestehend aus Ketamin 9 mg / ml und Xylazin 1mg/ml) pro 10 g Körpergewicht intraperitoneal mit einer 1 ml, 27G ½ &quot;Tuberkulinspritze. </li><li> Prep Maus für Chirurgie: 1) rasieren Halsbereich Maus (aus Kiefer-Linie nach oben und aus Brustbein zu den Waffen), 2) schrubben OP-Bereich dreimal mit chorhexadine getränkten Gaze Plätze, 3) endgültige Peeling mit betadine getränkte Gaze, 4 getan ) sanft gelten Augensalbe die Augen vor dem Austrocknen zu verhindern. </li><li> Prüfen Pedal Reflex, um sicherzustellen, Maus ausreichend sediert. </li><li> Zeigen Tier in Rückenlage auf einer sterilen Feldbarriere unter dem Binokular und sichern das Tier an Ort und Stelle mit Gewebeband. </li><li> Scrubs Hände und fingernails lege dann sterile OP-Handschuhe. </li><li> In einer sterilen Mode, packen die offene Chirurgie und vereinbaren Instrumente. </li><li> Zeigen sterilen Tuch über Tier, so dass nur OP-Gebiet ausgesetzt. </li></ol> 3. Chirurgische Zugang zu Schilddrüsen-und Zell-Injection <ol><li> Mit einer sterilen Einweg-Skalpell, eine 1-zu-1.5 cm Längsschnitt entlang der Mittellinie des Halses. </li></ol> Hinweis: Die Abweichung von der Mittellinie erschwert tiefer schneiden, um die Luftröhre gelangen. Ziemlich präzise Mittellinienschnitt können Sie necken und durch den häutigen Gewebe hält links und rechts Speicheldrüsen zusammen geschnitten und reduziert das Risiko von Nicking oder Durchtrennung großen Arterien. <ol start="2"><li> Einen zweiten Einschnitt in die Halsmuskulatur rund um die Luftröhre und ziehen Sie dann die rechte Seite der eingeritzten Muskel zur Seite, um das Recht Schilddrüse freizulegen. </li><li> Hemostats kann an dieser Stelle eingesetzt werden, um die Muskelschicht halten aTeil für den einfachen Zugriff auf die Schilddrüse (Abbildung 1). </li></ol> Hinweis: Alternativ, wenn Verfahren von zwei OP-Personal durchgeführt wird, der Muskel Schicht kann einfach wieder mit einer Pinzette gehalten werden, während eine gebrauchsfertige injizierbare Spritze wird der Chirurg durch die Unterstützung der Mitarbeiter übergeben. <ol start="4"><li> Langsam injizieren 10 ul Zellsuspension in die rechte Schilddrüse mit einer 31G 5/16 &quot;Insulinspritze dann vorsichtig entfernen Nadel. </li></ol> 4. Closure of Surgical Site-und Recovery-Maus <ol><li> Naht Muskelschicht mit 6,0 Nahtmaterial entweder mit einem durchgehenden oder unterbrochenen Naht Stil. </li><li> Stich die Haut in der gleichen Weise. </li><li> Tragen Sie eine Schicht von Triple antibiotische Salbe direkt über Inzisionsstelle. </li><li> Erlauben Tier in Rückenlage auf warmen Heizkissen erholen. Sobald Tier kann Brustlage ohne Hilfe zu erreichen, kann es wieder mit anderen Mäusen platziert werden. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Post-operative Überwachung und Gewebeentnahme <ol><li> Überprüfen Sie die Inzisionsstelle und die allgemeine Gesundheit des Tieres täglich für eine Woche nach der Operation, dann einmal pro Woche zu überprüfen. Wenn die Fäden noch nach 14 Tagen erhalten, werden sie entfernt. </li></ol> Hinweis: Tiere Anzeichen von schlechter Gesundheit (z. B. erheblichen Gewichtsverlust, struppiges Haar, Atemnot) sollte eingeschläfert werden und Gewebe gesammelt. <ol start="2"><li> Sobald Mäusen haben eine vorgegebene postoperativen Zeit-Punkt erreicht, verwalten Ketamin / Xylazin wie oben beschrieben zu beruhigen. </li><li> Perfundieren Tier intrakardial und Ernte Schilddrüse / Luftröhre und anderen Geweben von Interesse (hier nicht im Detail beschrieben). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
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<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

In unserem Modell demonstriert Tiere Schilddrüse Metastasierung und Krankheiten im Zusammenhang Kachexie und Atemnot um 4 Wochen nach der Injektion. Wie bei den meisten anderen orthotopic Modelle verwendet injizierbaren Abgabe von einer Zellsuspension, die Injektion in das umgebende Gewebe und Nacheinspritzung Leckage über das Ziel verteilt sind möglich. Mit diesem wird gesagt, ist ein erkennbarer unbekannt nach diesem Verfahren produziert die Wirkung vorbei Exposition gegenüber nicht-verwandten Krankheit Metastasen oder Komplikationen. Dies ist ein allgemeines Problem bei den meisten xenographic Transplantationen, unabhängig von der Erkrankung untersucht. Dennoch kann es zu unbeabsichtigten Folgen von Metastasen deutlich, indem sie die gesamte Facette der Nadelspitze hat drang in die Membran fest, die über der Schilddrüse und langsam Vertreibung der Zellsuspension minimiert werden. Wenn das Leck während oder nach der Injektion beobachtet wird, kann diese Tiere aus der Studie verzichtet werden. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Es ist wichtig, dass die Tiere vor der Ernte werden die Schilddrüse / Luftröhre und andere Gewebe durchblutet. Die Vorteile sind zwei-fach, 1) rote Blutkörperchen gespült und nicht überladen histologischen Proben und 2) Gewebemorphologie und Integrität bewahrt. Außerdem resezierten Schilddrüse / Luftröhre, die entweder eine Tumormasse beigefügt oder in ihr begraben in einer Weise, dass anatomischen Landmarken, bevor sie für histologischen Präparat eingebettet identifiziert werden können geschnitten werden sollte. Dies wird dramatisch reduzieren Probenvorbereitung Zeit. In diesem Bericht beschreiben wir lokale Wachstum und Invasion von fortgeschrittenen Tumoren der Schilddrüse nach orthotopen Injektion von ATC-Zellen. ATC Metastasierung kann durch die Analyse von histologischen Präparaten von anderen Geweben unter Verwendung von Standard histologischen Färbungen, wie Hämatoxylin und Eosin oder durch Immunhistochemie Verwendung Zelle oder Pathologie relevante Marker untersucht werden. Dieses System kann weiter ausgebaut werden, indem genetically Modifizieren Schilddrüsenkrebs Zellen mit Fluoreszenz-Reporter, so dass Live-Aufnahmen verwendet werden, um Metastasen und die Wirksamkeit von therapeutischen Behandlungen zu überwachen.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 Zellkulturmedien</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>Verwendete Medien und Additive sind abhängig von der Zelllinie</td></tr><tr><td>TC10 Automatisierter Zellzähler</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Pinzette, gezahnt; Slight Curve, 4"</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Skalpell, Nr. 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Olsen Hegar Nadelhalter - 4 &frac12; " zartes gezacktes</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Nylon schwarz monofile Naht</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen, wiederverwendbar, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Stoffband, 1" x 10 yds</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>Zur Fixierung von anästhesierten</td></tr><tr><td>Mäusen Erdnussschneider/Trimmer</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>Zur Entfernung von Haaren an der Operationsstelle</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td><td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum Augensalbe</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 Gaze, 12-lagig</td><td>Butler Animal Health Supply</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>Steriles Feld, Barriere, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Vorhänge (CSR Wrap)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; "</td><td>Nadel Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16"</td><td>Nadel Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (9 mg/ml) / Xylazin (1 mg/ml) Lösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dreifache antibiotische Salbe</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ein orthotopen mausmodell des anaplastic schilddrüsenkarzinom

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Mehrere Arten von Tiermodellen für menschliche Schilddrüse Karzinome wurden eingerichtet, darunter subkutane Xenograft und orthotopen Implantation von Krebszellen in immundefiziente Mäusen. Subkutanen Xenograft-Modellen wurden für die präklinische Screening und Bewertung von neuen therapeutischen Behandlungen wertvoll. Es gibt eine Reihe von Vorteilen mit einer subkutanen Modell, 1) S, 2) reproduzierbar ist, und 3) Tumor-Einrichtung, das Wachstum und die Reaktion auf therapeutische Mittel kann durch Sichtprüfung überwacht werden. Allerdings hat stichhaltige Beweise Licht auf die Defizite des subkutanen Xenograft-Modellen 1-3 vergießen. Zum Beispiel, medizinische Behandlungen demonstriert heilenden Eigenschaften in subkutanen Xenograft-Modellen haben oft keine nennenswerten Auswirkungen auf die menschliche Krankheit. Die Mikroumgebung der Website von xenographic Transplantation oder Injektion liegt im Herzen dieser Verschiedenheit. Orthotopic Tumorxenotransplantates Modelle bieten eine biologisch relevanten Kontext, in dem die Krankheit zu studieren. Die Vorteile des Implantierens von erkrankten Zellen oder Gewebe in ihrer anatomischen Ursprungs Äquivalent in einem Wirtstier eine geeignete Stelle für die Tumor-Wirt-Wechselwirkungen, die Entwicklung der Krankheit im Zusammenhang mit Metastasen und die Fähigkeit zur ortsspezifischen beeinflussen Der therapeutische Mittel zu untersuchen. Daher hegen orthotopic Xenotransplantatmodellen weitaus klinischen Wert, weil sie reproduzieren eng menschliche Krankheit. Aus diesen Gründen wurde eine Reihe von Gruppen Vorteil einer orthotopen Schilddrüsenkrebs Modell als Recherche-Tool 4-7 gemacht. Hier beschreiben wir einen Ansatz, der einen orthotopen Modell für die Untersuchung von anaplastischen Schilddrüsenkarzinom (ATC), die sehr invasiv ist etabliert, widersteht Behandlung und ist praktisch in allen tödlich diagnostizierten Patienten. Kultivierte ATC Zellen als dissoziierte Zellsuspension in einer Lösung, die einen Basalmembran-Matrix hergestellt. Ein kleines Volumen langsam injektiert in der rechten Schilddrüse. Insgesamt Aussehen und die Gesundheit der Mäuse überwacht werden, um minimale postoperative Komplikationen zu gewährleisten und pathologischen Penetranz des Krebses zu beurteilen. Die Mäuse werden 4 Wochen getötet und die Gewebe für die histologische Analyse gesammelt. Tiere können zu späteren Zeitpunkten genommen werden, um mehr voraus Fortschreiten der Krankheit zu untersuchen. Die Produktion dieses orthotopen Mausmodell etabliert eine Plattform, die zwei Ziele erreicht: 1) unser Verständnis von ATC Pathologie und 2) Bildschirm aktuelle und zukünftige Therapeutika zur Wirksamkeit bei der Bekämpfung von ATC.

Wir haben festgestellt, 19 invasive Schilddrüsenhormonen aus insgesamt 20 Mäusen mit ATC Zellen nach 4 Wochen injiziert. In dem in 2A gezeigten, Mäuse, die eine Injektion von orthotopic 5X10 5 ATC Zellen unter Bedingungen gezüchtet beigefügten weisen erhebliche Infiltration von Krebszellen in der Schilddrüse mit 4 Wochen nach der Injektion. Die Art der eindringenden Zellen ATC mit einer charakteristischen gespindelt Zellen und mittel-bis übergroßes Zellen mit eosinophilen Zytoplasma und großen Kernen wurde von Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E)-Färbung überprüft. Zum Vergleich wird die Schilddrüse und die Luftröhre aus einem nicht-injizierten Kontrolltieren in 2B gezeigt. Follikel des injizierten Tier zeigen eine enge, aber locker, Vereinigungsfreiheit und haben im Wesentlichen eine runde Morphologie. Aufgrund der geringen Größe der Schilddrüse und Verwendung von injizierbaren Abgabe, ungewollte Ergebnisse entstehen. 3A zeigt dieam häufigsten beobachteten, ist die Entwicklung einer Tumormasse von außerhalb, aber nicht umfasst, die Schilddrüse. Dies ist mehr als wahrscheinlich, aufgrund Nadelpenetration durch und über die Schilddrüse, wenn Zellen ausgestoßen werden. Gelegentlich präsentiert Mäuse ohne Tumorwachstum, sowohl grob und histologisch nachgewiesen werden, wie in 3B gezeigt. Abwesenheit von nachweisbaren Tumor Entwicklung kann durch Vertreibung der Zellsuspension aus der Injektionsstelle und Verbreitung in benachbarte Gewebe und Hohlräume verursacht werden. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Abbildung 1"/> Abbildung 1. Offenlegen der Schilddrüse. Labels bezeichnen die rechte und linke Schilddrüse flankieren die Luftröhre. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Abbildung 2"/> Abbildung 2. Die histologische Untersuchung des Tumorwachstums undvasion nach erfolgreicher Schilddrüse Injektion. Gewebeproben wurden geschnitten entlang der koronalen Ebene. A) Bild bei 200X von Maus ausstellenden erhebliche Tumorwachstum mit charakteristischen gespindelt Zellen und mittel-bis übergroßes Zellen mit eosinophilen Zytoplasma und großen Kernen in Hämatoxylin und Eosin (entnommen H &amp; E)-Färbung Tu zeigt die primäre Läsion aus denen Tumorzellen dringen in die Schilddrüse B) Luftröhre und Schilddrüse von Kontrolltieren (Bild im 100X genommen) Tu, Tumoren;... S, glatte Muskelzellen, Tr, Luftröhre, Thy, Schilddrüse. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Abbildung 3"/> Abbildung 3. Unbeabsichtigte Ergebnisse der orthotopen Injektion. Gewebeproben wurden geschnitten entlang der koronalen Ebene. A) Peripheral Tumorwachstum ohne Wachstum deutlich in der thyroid (schwarzer Pfeil, Bild bei 100X genommen). B) Fehlende Tumordetektion auf brutto (nicht gezeigt) oder histologische Untersuchung (Bild bei 50X gemacht). Thy, Schilddrüse.

Generierung einer orthotopen Mausmodell der anaplastischen Schilddrüsenkarzinom wird hier beschrieben. Diese Technik beschäftigt chirurgische Platzierung des menschlichen anaplastischen Schilddrüsenkrebs Zellen in der Schilddrüse von immungeschwächten Mäusen, wodurch eine weitere klinisch relevante Einstellung, um den Krankheitsverlauf sowie Bildschirm innovative therapeutische Interventionen zu studieren.

Ein orthotopen Mausmodell des Anaplastic Schilddrüsenkarzinom

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die chirurgische Platzierung von humanen anaplastischen, Schilddrüsenkarzinom- oder TC-Zellen in die Schilddrüse zu demonstrieren, um ein orthotopes Xenotransplantat-Mausmodell zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zunächst eine TC-Zellen kultiviert und geerntet wird. Nachdem Sie die Maus für die Operation vorbereitet haben, legen Sie die Schilddrüse durch zwei aufeinanderfolgende Längsschnitte im Hals frei und injizieren Sie die A-TC-Zellen langsam in die rechte Schilddrüse.Der letzte Schritt besteht darin, die Schnitte mit Nähten zu schließen und der Maus zu ermöglichen, sich zu erholen. Letztendlich wird die histologische Untersuchung von Proben aus resezierten Geweben verwendet, um das Tumorwachstum und die Tumorinvasion unter einer Vielzahl von Bedingungen nachzuweisen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der subkutanen Xenotransplantat-Transplantation besteht darin, dass die orthotope Transplantation TC-Zellen in ihrer biologischen Nische platziert und das Fortschreiten der Krankheit und die Pathologie, wie sie beim Menschen auftritt, genau repliziert.Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen zu beantworten, wie z. B. die Bestimmung der biologischen Mechanismen der Aggressivität von Schilddrüsenkrebs. Beginnen Sie dieses Verfahren mit der Kultivierung der humanen A TC-Zelllinie TJ 11 T in sechs Well-Kulturplatten unter Verwendung eines vollständigen RPMI 1640-ergänzten Mediums einen Tag vor der Zellernte, wenn die Zellen zu 70 bis 80 % konfluent aufgetaut sind, 0,01 Milliliter des Hauptgels bei vier Grad Celsius. Ernten Sie die Zellen mit Trypsin, sobald sie nach dem Pelletieren der Zellen zu 80 bis 90 % konfluent geworden sind, aspirieren Sie das Medium und resuspendieren Sie die Zellen in zwei Millilitern supplementiertem RPMI 1640 Medium für jede geerntete Sechs-Well-Platte.Bestimmen Sie als Nächstes die Zelldichte, indem Sie die Zellsuspension eins zu eins mit 0,4 % Triamblau-Farbstoff mischen und die Zelldichte mit einem automatisierten Zellzähler TC 10 bestimmen. Berechnen Sie das Volumen der Zellsuspension, die für die Injektion von 500.000 Zellen pro Maus benötigt wird. Stellen Sie sicher, dass ausreichend Zellen für die Implantation zur Verfügung stehen, indem Sie die doppelte Anzahl der geplanten Implantate berechnen.Das erforderliche Volumen der Zellsuspension wird in ein konisches 15-Milliliter-Röhrchen überführt. Anschließend bei 200 g vier Minuten lang bei Raumtemperatur zentrifugieren. Aspirieren Sie dann das Medium und resuspendieren Sie die Zellen mit 100 Millionen Zellen pro Milliliter in vollständigem, mit RPMI 1640 supplementiertem Medium.Übertragen Sie anschließend die Zellen in ein 1,6-Milliliter-Röhrchen. Fügen Sie ein Volumen Matri-Gel hinzu und mischen Sie es vorsichtig, indem Sie es langsam ein- und auspipettieren. Legen Sie die Zellsuspension auf Eis, bis sie benötigt wird.Sterilisieren Sie zunächst die Operationszone, zu der auch das Präparierfernrohr und die Umgebung gehören, indem Sie alle Oberflächen mit 70 % Ethanol abwischen. Bereiten Sie dann den Erholungsbereich vor, indem Sie Heizlampen einschalten und sterile Pads ablegen. Betäuben Sie die Maus und bereiten Sie sie auf die Operation vor, indem Sie zuerst die Halsregion der Maus vom Kiefer bis zum oberen Rand des Brustbeins und bis zu jedem Arm rasieren.Als nächstes verschrauben Sie den Operationsbereich dreimal, indem Sie abwechselnd mit Chlorhexidin getränkte Gau-Quadrate und Ethanol verwenden. Dann ein letztes Mal mit Betadine getränkter Gaze. Tragen Sie auch sanft Augensalbe auf, um ein Austrocknen der Augen zu verhindern.Überprüfen Sie an dieser Stelle den Pedalreflex, um sicherzustellen, dass die Maus ausreichend sediert ist. Legen Sie dann das Rückenliegen der Maus auf eine sterile Einwegfeldbarriere. Befestigen Sie die Maus unter dem Präparierfernrohr mit Stoffband.Schrubben Sie anschließend Hände und Fingernägel gründlich und ziehen Sie steril sterile OP-Handschuhe an, öffnen Sie das OP-Paket und ordnen Sie die Instrumente an. Legen Sie zum Schluss ein steriles Tuch über die Maus, so dass nur die Operationsstelle freiliegt. Beginnen Sie mit einem sterilen Einwegskalpell mit einem ein bis 1,5 Zentimeter großen Längsschnitt entlang der Mittellinie des Rachens.Weichen Sie nicht von der Mittellinie ab, da dies die Wahrscheinlichkeit einer Einkerbung oder Durchtrennung großer Arterien erhöhen würde. Machen Sie einen zweiten Schnitt in die Gurtmuskulatur, die die Luftröhre umgibt. Ziehen Sie dann die rechte Seite des eingeschnittenen Muskels zur Seite, so dass die rechte Schilddrüse freigelegt wird.Lassen Sie die Spritze von einem Assistenten übergeben. Injizieren Sie es langsam mit einer 31-Gauge-Insulinspritze in die rechte Schilddrüse. Entfernen Sie dann vorsichtig die Nadel und vernähen Sie die Muskelschicht mit sechs OH Nylon-Monofilament-Nahtmaterial in einem unterbrochenen Nahtstil.Zum Schluss nähen Sie die Haut postoperativ auf die gleiche Weise zusammen. Tragen Sie eine Schicht dreifacher antibiotischer Salbe direkt auf die Inzisionsstelle auf. Lassen Sie die Maus unter einer Lampe rückwärts liegen.Sobald die Maus ohne Hilfe sternal liegen kann, kann sie wieder zu anderen Mäusen in ihren Käfig gesetzt werden. Überprüfen Sie die Inzisionsstelle und den allgemeinen Gesundheitszustand der Maus eine Woche lang täglich nach der Operation. Dann schauen Sie einmal pro Woche vorbei.Wenn die Maus zu irgendeinem Zeitpunkt Anzeichen einer Verschlechterung ihres Gesundheitszustands zeigt, sollte sie eingeschläfert und ihr Gewebe entnommen werden. Sobald die Mäuse einen vorher festgelegten postoperativen Zeitpunkt erreicht haben, betäuben sie sie mit Ketamin und Xylazin und perfundieren das Tier verspätet mit Puffer, gefolgt von Fixiermittel, dann entnehmen sie das Gewebe und verarbeiten es für die Histologie. Die Schilddrüse und die Luftröhre eines nicht injizierten Kontrolltieres sind hier dargestellt, wobei Hämatin- und Eosin-Färbefollikel eine enge, aber lose Assoziation aufweisen und im Wesentlichen eine runde Morphologie aufweisen.Im Gegensatz dazu zeigen Mäuse, die eine orthotope Injektion von 500.000 A TC-Zellen erhalten, vier Wochen nach der Injektion eine signifikante Infiltration von Krebszellen in die Schilddrüse. Die Art der eindringenden Zellen zeigt charakteristische spindelförmige Zellen und mittel- bis riesengroße Zellen mit eosinophilem Zytoplasma und großen Zellkernen. Aufgrund der geringen Größe der Schilddrüse und der Verwendung von injizierbaren Verabreichungen können unbeabsichtigte Ergebnisse auftreten, wie z. B. die Entwicklung einer Tumormasse außerhalb, aber nicht von der Schilddrüse umgebend.Dies ist auf das Eindringen der Nadel durch die Schilddrüse zurückzuführen, wenn Zellen ausgestoßen werden. Gelegentlich werden Mäuse ohne Tumorwachstum, sowohl grob als auch histologisch, nachgewiesen, wie hier gezeigt. Das Fehlen einer nachweisbaren Tumorentwicklung wird durch die Ausstoßung der Zellsuspension von der Injektionsstelle in benachbarte Gewebe und Hohlräume verursacht. Einmal gemeistert, kann diese Technik innerhalb von 20 Minuten durchgeführt werden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie Ihr eigenes orthotopes Modell für anaplastisches Schilddrüsenkarzinom erstellen können.Durch den chirurgischen Zugang zur Schilddrüse und die Injektion von kultivierten C-Zellen.

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Zwei Techniken können verwendet werden, um dieses Modell zu etablieren werden: Injektion einer Krebszelle Suspension in den Blinddarm Wand oder Transplantation von einem Stück des subkutanen Tumor auf den Blinddarm. Dieses Modell ist nützlich für die Untersuchung der natürlichen Entwicklung von Darmkrebs und Erprobung neuer Therapeutika gegen den Darmkrebs.

Orthotopen Mausmodell der Darmkrebs-

Einem orthotopen Modell des seröse Ovarialkarzinom in immunkompetenten Mäusen für In vivo Tumor Imaging und Überwachung der Tumor Immunantworten

Das Video demonstriert die orthotope Inokulationstechnik für Brustkrebs in einem Mausmodell. Diese Technik führt zu einer hohen Tumorgeneserate mit geringerer Variabilität in Tumorgröße und -form im Vergleich zur subkutanen oder nicht-chirurgischen Injektion.

Orthotope Injektion: Implantation gewebespezifischer Krebszellen in eine erwachsene Maus

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur orthotopen Inokulation von Schilddrüsenkrebszellen in die Schilddrüse von Mausmodellen, die dann als wertvolle Plattform dienen können, um die Karzinogenese zu beurteilen und mögliche Behandlungsstrategien zu entdecken.

Orthotope Inokulation von Schilddrüsenkrebszellen in die Schilddrüse der Maus: Ein Verfahren zur Etablierung eines orthotopen Mausmodells für Schilddrüsenkrebs

Eine orthotope Brustkrebs primären Tumormodell und die operative Entfernung des Primärtumors Maus Lebensdauer zu verlängern spontane Metastasierung zu erzeugen, werden beschrieben. Das Tumorwachstum und Progression werden überwacht und durch Luciferase Fluoreszenzbildgebung quantifiziert.

Ein orthotopen Mausmodell des Spontan Metastasierung von Brustkrebs

Prostatakrebs ist die zweithäufigste krebsbedingte Todesursache in den Vereinigten Staaten. Ein orthotopes Krebsmodell bietet einen nützlichen Ansatz, um die Biologie des Prostatakarzinoms zu verstehen und die Wirksamkeit von Therapieschemata zu bewerten. Dieses Protokoll beschreibt detaillierte Schritte, die zur Etablierung eines orthotopen Prostatakrebs-Mausmodells erforderlich sind.

Präklinische Orthotopische Mausmodell der menschlichen Prostata-Krebs

Im klinischen Kontext werden Patienten mit lokalisierten Bauchspeicheldrüsenkrebs einer Pankreastektomie unterzogen, gefolgt von einer adjuvanten Behandlung. Dieses hier berichtete Protokoll zielt darauf ab, eine sichere und effektive Methode zur Modellierung dieses klinischen Szenarios bei nackten Mäusen durch orthotopische Implantation von Bauchspeicheldrüsenkrebs zu etablieren, gefolgt von distaler Pankreatektomie und Splenektomie.

Ein orthotopisches Resektions-Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Hier stellen wir eine Standard-Pipeline vor, um murine ATC-Tumore durch spontane gentechnisch veränderte Mausmodelle zu erhalten. Des Weiteren präsentieren wir die Tumordynamik und pathologische Informationen über die primären und metastasierten Läsionen. Dieses Modell wird den Forschern helfen, die Tumorentstehung zu verstehen und die Entdeckung von Medikamenten zu erleichtern.

Spontanes Mausmodell des anaplastischen Schilddrüsenkarzinoms

Es wurden mehrere Arten von Tiermodellen der Hashimoto-Thyreoiditis etabliert, ebenso wie die spontane Autoimmunthyreoiditis bei der NOD-Maus. H-2h4-Mäuse sind ein einfaches und zuverlässiges Modell für die HT-Induktion. Dieser Artikel beschreibt diesen Ansatz und bewertet den pathologischen Prozess für ein besseres Verständnis des SAT-Mausmodells.

Generierung eines Mausmodells für spontane Autoimmunthyreoiditis

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Hochfrequenz-Sonographie zur Darstellung der gesamten Schilddrüse der Maus und zur Überwachung des Wachstums des anaplastischen Schilddrüsenkarzinoms.

Hochauflösende Sonographie zur Analyse orthotoper ATC-Tumoren in einem gentechnisch veränderten Mausmodell

Das vorliegende Protokoll etabliert und charakterisiert ein patientenabgeleitetes Xenotransplantat-Modell (PDX) für anaplastisches Schilddrüsenkarzinom (ATC) und Kopf-Hals-Plattenepithelkarzinom (HNSCC), da PDX-Modelle schnell zum Standard im Bereich der translationalen Onkologie werden.

Etablierung und Charakterisierung von patientenabgeleiteten Xenotransplantatmodellen des anaplastischen Schilddrüsenkarzinoms und des Kopf-Hals-Plattenepithelkarzinoms

Lernen Sie die chirurgische Platzierung von anaplastischen Schilddrüsenkarzinomzellen in die Schilddrüse immundefizienter Mäuse. Diese orthotope Xenotransplantation ermöglicht realistische Studien zur Tumorprogression und Therapieentwicklung.

Ein orthotopen Mausmodell des Anaplastic Schilddrüsenkarzinom

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