Name: Mausmodell der Wundheilung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Erfahren Sie ein murines Wundheilungsmodell mit Silikonschiene zur Verhinderung der Wundkontraktion und Förderung der Epithelialisierung. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Präklinische Tests von Therapeutika.

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Die Autoren bedanken sich finanzielle Unterstützung aus dem National Health and Medical Research Council (NHMRC) von Australien (Projektstipendium ID: 632512) bestätigt. Louise Dunn wurde durch eine NHMRC Early Career Fellowship und Christina Bursill von einem National Heart Foundation Career Development Fellowship unterstützt.

1. Herstellung von Schienen und Okklusivverbänden <ol><li> Gliederung 10 mm Kreise auf 0,5 mm dicken Silikon-Folien und Verwendung einer Schere oder einem Biopsiestanze zu Silikon Festplatten erstellen. </li><li> Center ein 5 mm Biopsiestanze in der Mitte des 10 mm Kreis und drücken Sie sie fest, um ein Loch, um einen &quot;Donut&quot;-ähnliche Scheibe, die wie eine Schiene verwendet werden Formular zu erstellen. </li><li> Gliederung 10 mm Kreise auf einem transparenten Okklusivverband wie Opsite und mit einer Schere kreisförmigen Dressings erstellen. </li></ol> 2. Versuchstiere <ol><li> Erhalten Tier Ethikkommission Zulassung für alle Experimente, die ausgeführt werden. </li><li> Mit 8 Wochen alt (22-26 Gramm) männlich C57BL/6J-Mäusen von einem kommerziellen Züchter (zB The Jackson Laboratories). </li><li> Halten Mäuse in Standard-Bedingungen von 21 ° C und eine 12 Stunden Licht-Dunkel-Zyklus mit freiem Zugang zu Futter und Wasser. </li><li> (Optional): Diabetes kann in 6 bis 7 Wochen alten Mäusen durch einen Bolus intraperitoneale inje induziert werdenktion von 165 mg / kg Streptozotocin (in Citratpuffer, pH 4,5), die mit Hyperglykämie durch regelmäßige Blutzuckermessung (AccuChek glucometer) bestätigt. Diabetische Mäuse haben Polyurie und so ihr Bettzeug müssen öfter gewechselt werden, um Feuchtigkeit zu beseitigen und ihre Gewichte sollten engmaschig überwacht werden. </li></ol> 3. Anästhesie und Operative Vorbereitung <ol><li> Induce Vollnarkose mit Isofluran 5% in 100% Sauerstoff (Flussrate 1 L / min) und Aufrechterhaltung einer Narkose mit 1-3% Isofluran. </li><li> Sicherstellen, dass die tiefe Pedal Reflexe der Maus werden unterdrückt und platzieren Sie den Mauszeiger in der Bauchlage. </li><li> Bereiten Sie den operativen Bereich durch Entfernen Fell mit Schermaschinen von der Basis des Halses zu 3 cm weiter nach unten den Rücken und zwischen den beiden Schulterblättern. </li><li> Eine leichte Anwendung der Enthaarungscreme kann nicht länger als 2 min angewendet werden. Wet Mullkompressen kann verwendet werden, um alle zu gewährleisten und Sahne restlichen Fell entfernt wird. </li><li> Wischen Sie die Haut mit einemAlkoholtupfer und zwei Anwendungen von 10% PVP-Jod (Betadine) und drapieren die Maus. </li></ol> 4. Exzision und Schienung Wound <ol><li> Schematische Darstellung des murinen Wundheilung Modell ist in Abbildung 1 dargestellt. </li><li> Verwenden Sie eine sterile 4 mm Biopsiestanze zwei kreisförmige Muster für die Wunde auf beiden Seiten der Maus die Mittellinie auf der Höhe der Schultern skizzieren (siehe Abbildungen 2a und 2b). </li><li> Verwenden gezackten Zange, um die Haut in der Mitte der Umriss und Iris Schere, um ein Full-Dicke Wunde, die durch das subkutane Gewebe (Abb. 2c bis 2d), einschließlich der Panniculus carnosus (Abbildung 2e) erstreckt erstellen heben, und Verbrauchsteuern die kreisförmiges Stück Gewebe. </li><li> Wiederholen des Prozesses für die Wunde auf der anderen Seite der Mittellinie (Fig. 2f). </li><li> Entfernen Kunststoff-Schutzschicht überzogen von jeder Seite des Silikons Schiene. </li><li> Bewerben cyanoacrylate Klebstoff (zB Sekundenkleber oder Krazy Glue) auf der einen Seite aus einem Silikon-Schiene. </li><li> Center die Schiene über der Wunde (Abbildung 2g) und Anker die Schiene mit unterbrochenen 6-0 Nylonnaht die Positionierung (Abbildung 2h) zu gewährleisten. </li><li> Wiederholen Sie den Vorgang auf der Schienung andere Wunde. </li><li> Wenn zu dieser Zeit erforderlich sein sollte, gelten die therapeutische Verbindung, die getestet werden (bis zu 100 ul) einer Wunde (2i) und dem Fahrzeug an die andere. </li><li> Decken Sie die Wunde mit einer transparenten Okklusivverband (z. B. OpSite) (2j-2k). </li><li> Ein Lineal ist unter den Schienen gelegt und eine mikroskopische Aufnahme gemacht (Abb. 2l). </li></ol> 6. Postoperative Behandlung <ol><li> Carprofen (5 mg / kg) einmal täglich über subkutane Injektion für post-operative Schmerzlinderung verabreicht. </li><li> Nach der Operation Tiere werden einzeln in Käfigen gehalten und auf Wärme mats bis vollständig erholt. </li><li> Überwachen Tiere zweimal täglich für Manifestationen von Schmerzen und Gewichtsverlust. Wir beobachteten keine groben Verhaltens Displays von Schmerzen oder Gewichtsverlust. </li></ol> 7. Wound Messung und Behandlung <ol><li> Die Wunde kann täglich gemessen werden. </li><li> Induce Vollnarkose mit 5% Isofluran-Gas (Flussrate 1 L / min), und dann sicherstellen, dass die tiefen sensorischen Reflexe der Maus unterdrückt werden mit 1-3% Isofluran. </li><li> Vorsichtig schälen die Okklusivverband mit einer Pinzette. </li><li> Verwenden chirurgischen Bremssättel, um die Wunde Durchmesser messen. Wir nehmen den Mittelwert aus drei Messungen entlang der X-, Y-und Z-Achse (Abb. 2m-2o) sowie eine Mikrofotografie für zukünftige Referenz (Abbildung 2p). </li><li> Optional: Zu diesem Zeitpunkt kann das Tier für Durchblutung mittels Laser Doppler Imager (Abbildung 2q) beurteilt werden. </li><li> Re-Anwendung der therapeutischen Verbindung und der Fahrzeugsteuerung kann Leistung seinmed. an dieser Stelle. </li><li> Eine saubere transparent Okklusivverband wird dann neu aufgetragen und die Tiere warm gehalten, bis sie vollständig erholt. </li><li> Hinweis: Wenn Schienen nicht ordnungsgemäß gesichert, die Wunde wird leicht schrumpfen (Abbildung 2r). </li></ol> 8. Die histologische Analyse <ol><li> Euthanize die Mäuse nach 10 Tagen mit einer Überdosis Narkose. </li><li> Mit einer Pinzette und einem Skalpell entfernen Sie die Nähte und vorsichtig abziehen der Schiene. </li><li> Verwenden Irisschere eine breite durchgehende Exzision um und unter der Wunde zu schaffen und Inkubieren des Gewebes in 4% Paraformaldehyd in Phosphat gepufferter Salzlösung (PBS) bei 4 ° C über Nacht. </li><li> Übertragen Gewebe bis 17% Saccharose in PBS-Lösung für weitere 24 Stunden bei 4 ° C und entfernen Sie überschüssige Lösung durch Abtupfen sorgfältig auf das Gewebe und in OCT-Verbindung und frieren bei -80 ° C. </li><li> Hämatoxylin und Eosin-Färbung kann die gewickelte Struktur und Epithelzellen Spalt zu visualisieren. Neovascularisation durch immunhistochemische Analysen überprüft werden, um die Anzahl der Kapillaren (mit von Willebrand-Faktor) zu bestimmen. </li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+essentials%3A+let+there+be+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
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<li>Reid, R. R., Said, H. K., Mogford, J. E., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+wound+healing%3A+pursuing+surgical+models+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">The future of wound healing: pursuing surgical models in transgenic and knockout mice.</a> J. Am. Coll. Surg. 199, 578-585 (2004).</li>
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<li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 969618(2011).</li>
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<li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li>
<li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 13505-13510 (2009).</li>
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<li>Chung, T. Y., Peplow, P. V., Baxter, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+photobiomodulatory+effects+of+laser+irradiation+on+wound+healing%3A+development+of+an+improved+model+for+dressing+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Testing photobiomodulatory effects of laser irradiation on wound healing: development of an improved model for dressing wounds in mice.</a> Photomed. Laser Surg. 28, 589-596 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Dies ist eine experimentelle Mausmodell der kutanen Wundheilung. Ein wesentliches Merkmal dieses Modells ist die Verwendung von Silikon-Schienen gewickelt Kontraktion zu verhindern, so dass Reepithelisierung und neuem Gewebe auftreten, so dass es ähnlich zu dem Verfahren, das in Menschen auftritt. Dieses Modell ist vielseitig und kann verwendet werden, um die Wundheilung bei sowohl physiologische und pathophysiologische (zB Diabetes mellitus) Einstellungen zu bewerten. Das Modell kann auch verwendet werden, um ...

Wundheilungsstörungen ist verantwortlich für erheblichen Morbidität und Mortalität weltweit, dies gilt vor allem für Patienten mit Diabetes mellitus 1,2. Beim Menschen ist die Wundheilung ein Kontinuum von Prozessen, in denen es erhebliche Überschneidungen 3. Unmittelbar nach der Verwundung, entzündliche Prozesse initiiert werden. Entzündungszellen freizugeben Faktoren, die die Prozesse der Zellproliferation, Migration und Angiogenese zu fördern. Nach Reepithelisierung und neuem Gewebe gibt es eine Phase der Umgestaltung, die sowohl Apoptose und Neuorganisation der Matrixproteine ​​wie Kollagen bringt. Die Komplexität der Wundheilung können derzeit nicht in vitro repliziert werden, und dies erfordert die Verwendung von Tiermodellen. Bisher wurden Wundheilung Studien Großtiermodellen, wie Schweine beschränkt, um sicherzustellen, dass die Heilungsprozesse gleichwertig und vergleichbar Menschen. Allerdings mit großen animals für solche Studien kann schwierig sein, zu Haus und sind nicht immer praktisch 4. Das Labor Maus stellt eine kostengünstige Tiermodell die leicht genetisch für mechanistische Untersuchungen 5-7 manipuliert werden. Allerdings murinen Wunden heilen anders für die menschliche, vor allem auf den Prozess der Kontraktion 8. Dies ist zum Teil aufgrund einer umfangreichen subkutane quergestreiften Muskulatur Schicht genannt Panniculus carnosus, die weitgehend abwesend in den Menschen ist. Bei Mäusen, ermöglicht diese Muskelschicht der Haut, sich unabhängig von den tieferen Muskeln bewegen und ist verantwortlich für die schnelle Kontraktion der Haut folgende Verwundung. Um diese Einschränkung zu überwinden, können murine Wundheilung geeignet ist, menschliche Wundheilung durch Verwendung einer Schiene (1) 8,9 replizieren. In diesem Video zeigen wir die Wunde splinted murinen Modell, das Wundkontraktion eliminiert und mehr annähert die menschlichen Prozesse der Re-epithelialization und neuem Gewebe. In diesem Modell zwei voller Dicke Resektionen, die die panniculus carnosus enthalten, werden auf dem Rücken, einen auf jeder Seite der Mittellinie der Maus erzeugt. Ein Silikon-Schiene wird um die Wunde mit Hilfe von Klebstoff angebracht und die Schiene dann mit unterbrochenen Nähten befestigt. Jede Maus dient als seine eigene Kontrolle, mit einer Wunde, die Behandlung und die andere Fahrzeug-Steuerung, wodurch der Anzahl der Tiere. Nach topischer Anwendung wird eine transparente Okklusivverband aufgebracht. Der Verband kann entfernt werden, wenn weitere topische Anwendungen und / oder Messung der Wundfläche 10,11 erforderlich. Bei Beendigung von Experimenten Wundverschluss morphologischen Architektur und der Grad der Gefäßneubildung durch Immunhistochemie untersucht werden. Diese kostengünstige und einfach zu Modell ausführen, können auch verwendet werden, um die Wundheilung im Rahmen von Diabetes mellitus oder anderen pathophysiologies beurteilen.

<table><tbody><tr><td>Press-to-Seal-Silikonfolie 0,5 mm dick</td><td>Invitrogen</td><td>P18178</td><td>Geschnitten in "Donuts" mit einem Außendurchmesser von 1 cm außen, 0,5 cm innendurchmesser</td></tr><tr><td>Biopsie-Stanze 5 mm</td><td>Steifel</td><td>BC-B1-0500</td><td>Zur Umrandung des zu exzidierenden Wundbereichs</td></tr><tr><td>Vannas Schere 8,5 cm gebogen</td><td>World Precision Instruments </td><td>501232</td><td>Für Wundschnitt und Exzision</td></tr><tr><td>Dumonte #7b Pinzette, 11 cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>501302</td><td>Zum Greifen der Haut beim Erstellen von Schnitten und Exzidieren von Haut </td></tr><tr><td>Graefe-Zange, gezahnt 10 cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>14142</td><td>Zum Befestigen einer Silikonschiene an</td></tr><tr><td>der Haut Nadelhalter, glatte Backen, gebogen, 12,5 cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>14132</td><td></td></tr><tr><td>Malis-Zange, glatt, gerade, 12 cm</td><td>Codman and Shurtleff, Inc (J& Ampere; J)</td><td>80-1500</td><td>Zum Vernähen der Silikonringe mit der Haut</td></tr><tr><td>Lineal, 0,5 mm Abstufung</td><td>n/a</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Messschieber 0,25 mm Abstufung</td><td>Duckworth und Kent</td><td>9-653</td><td>Zum Messen der Wundfläche</td></tr><tr><td>Gegenüberliegende FlexiFix transparente Klebefolie. 10 cm x 1 m</td><td>Smith & Neffe</td><td>66030570</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl (Carprofen)</td><td>Pfizer</td><td>462986</td><td></td></tr></tbody></table>

mausmodell der wundheilung

Murine Model of Wound Healing

Wundheilung und Reparatur sind die komplexesten biologischen Prozesse, die im menschlichen Leben auftreten. Nach einer Verletzung, werden mehrere biologische Pfade aktiviert. Wundheilungsstörungen, die bei Diabetes-Patienten zum Beispiel auftritt, kann zu schweren ungünstigen Ergebnisse wie Amputation führen. Es besteht daher ein zunehmender Impulse neuen Substanzen, die die Wundheilung fördern, zu entwickeln. Die Prüfung dieser hat Großtiermodellen wie Schweine, die oft unpraktisch beschränkt. Mäuse sind die ideale präklinischen Modell, da sie wirtschaftlich und zugänglich genetische Manipulation, die für mechanistische Untersuchung erlaubt sind. Allerdings Wundheilung in einer Maus unterscheidet sich grundlegend von dem des Menschen, wie es geschieht primär durch Kontraktion. Unsere Mausmodell überwindet diese durch den Einbau einer Schiene um die Wunde. Durch Schienung die Wunde, ist die Reparatur dann abhängig von Epithelisierung, Zellproliferation und Angiogenese, die eng spiegeln diebiologische Prozesse der menschlichen Wundheilung. Während erfordern Konsistenz und Pflege, bedeutet das Mausmodell nicht mit komplizierten chirurgischen Techniken und erlaubt die robuste Prüfung vielversprechende Wirkstoffe, zum Beispiel die Angiogenese fördern oder hemmen Entzündungen. Weiterhin wirkt jede Maus als seine eigene Kontrolle als zwei Wunden bereit sind, so dass die Anwendung sowohl der Testverbindung und der Fahrzeugsteuerung am selben Tier. Abschließend zeigen wir eine praktische, einfach zu erlernen und robustes Modell der Wundheilung, die vergleichbar mit der des Menschen ist.

(Tag 0 Durchmesser / Tag x Durchmesser) - Wundverschlusssystem Kurve durch Berechnung des durchschnittlichen Durchmessers der gewickelten und Exprimieren der Ergebnisse in Prozent, also 100 bestimmt. In diesem Experiment wurde eine therapeutische Verbindung (oder MFK) wurde täglich auf die Wunde aufgetragen. Die therapeutische Verbindung stark beschleunigte Wundheilung (Abbildung 3). Es ist wichtig zu beachten, dass die Schienen für die Dauer des Experiments muss beibehalten werden, das Entfern...

Ein Mausmodell von kutanen Wundheilung, die zur therapeutischen Verbindungen in physiologischen und pathophysiologischen Einstellungen beurteilen kann.

Mausmodell der Wundheilung

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine Wunde zu erzeugen, die mit einer Schiene versehen wird, um eine Kontraktion zu verhindern und ausschließlich die Epithelialisierung sowie die Angiogenese zu fördern. Dies wird erreicht, indem zunächst der Rücken präpariert und zwei vollständig durch die Haut reichende exzisionelle Wunden auf beiden Seiten der Mittellinie angelegt werden. Anschließend wird eine Schiene über die Wunde platziert und mit Nähten fixiert.Anschließend wird die Wunde vermessen und Behandlungen angewendet. Abschließend wird ein okklusives Pflaster über die Wunde gelegt, und die Maus darf sich erholen. Letztendlich dient das kutane exzisionelle Wundheilungsmodell der Beurteilung der Wundheilung, der Epithelialisierung und damit verbundener Prozesse wie Proliferation und Angiogenese.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen Methoden besteht darin, dass die Wundkontraktion verhindert wird. Dies fördert die Epithelisierung, Proliferation und Angiogenese, wodurch der Wundheilungsprozess besser nachgeahmt wird. Beim Menschen eignet sich diese Methode besonders zur Beurteilung der Wirksamkeit therapeutischer Substanzen, und da jede Maus als ihr eigener Kontrolltier dient, wird die Anzahl der für eine Studie benötigten Tiere minimiert.Bereiten Sie zunächst die Splinte und okklusiven Verbände zur Herstellung eines Splints vor. Zeichnen Sie zunächst einen 10 Millimeter großen Kreis auf ein Blatt Silikon und erstellen Sie dann mit einer Schere oder einer Biopsiepunchvorrichtung Silikon-Scheiben. Zentrieren Sie anschließend einen 5 Millimeter großen Biopsiepunch in der Mitte der 10 Millimeter-Scheibe und drücken Sie fest, um einen ringförmigen, donutförmigen Splint zu erzeugen.Erstellen Sie kreisförmige, gleich große Wundauflagen aus transparentem okklusivem Verbandmaterial wie Opsite. Beginnen Sie damit, die ausreichende Anästhesietiefe bei einer anästhesierten Maus zu überprüfen. Nach der vollständigen Enthaarung des Operationsgebiets wird die Haut durch mehrfache Anwendung von Betadine und Alkohol gereinigt.Wenn bereit, verwenden Sie eine sterile 4-Millimeter-Biopsiepunch, um auf beiden Seiten der Mittellinie der Maus auf Schulterhöhe die Umrisse von zwei kreisförmigen Mustern anzulegen. Verwenden Sie anschließend gezahnte Pinzette, um die Haut in der Mitte des Umrisses anzuheben, und Iris-Scheren, um die Wunde zu erzeugen. Achten Sie darauf, das subkutane Gewebe einschließlich der Panniculus carnosus zu durchtrennen.Entfernen Sie das Gewebe von beiden Seiten, um zwei kreisförmige Wunden freizulegen. Entfernen Sie die Kunststoffschutzschicht von jeder Seite des Silikon-Splints und tragen Sie Cyanacrylat-Klebstoff auf eine Seite auf.Zentrieren Sie die Schiene über der Wunde und nähen Sie sie mit einzelnen 6-0-Nylon-Nähten fest. Wiederholen Sie den Schienungsprozess an der anderen Wunde. Zu diesem Zeitpunkt kann eine therapeutische Substanz auf eine Wunde aufgetragen werden, während die andere als Kontrolle dient.Als Fahrzeugkontrolle ein Lineal unter die Schienen legen und eine Fotomikrografie aufnehmen. Die Wunde mit einem der zuvor vorbereiteten runden Verbandstücke abdecken. Nach der Verabreichung eines Analgetikums das Tier in einem beheizten Käfig zur Erholung bringen.Die Tiere werden zweimal täglich auf Anzeichen von Schmerzen und Gewichtsverlust überwacht. Um die Wunde zu vermessen, betäuben Sie das Tier wie zuvor gezeigt und ziehen vorsichtig mit einer Pinzette die okklusive Abdeckung zurück. Messen Sie mit einem chirurgischen Messschieber den Wurddurchmesser an mehreren Stellen, um einen Mittelwert zu erhalten, und fertigen Sie eine Fotomikrografie zur späteren Referenz an.Zu diesem Zeitpunkt kann das Tier auf die Blutperfusion hin untersucht werden. Mit einem Laser-Doppler-Imager wird ein sauberes, transparentes Okklusivpflaster auf die Wunde aufgebracht, und das Tier wird warm gehalten, bis es sich vollständig erholt hat. Es ist wichtig zu beachten, dass die Wunde sich nach der Tötung durch Anästhetikumüberdosierung schnell zusammenziehen wird, falls die Splinte nicht ordnungsgemäß befestigt sind. In diesem Fall werden die Nähte mit einer Pinzette und einer Skalpellklinge entfernt und die Splinte vorsichtig von den Wunden abgelöst.Erstellen Sie mit Iris-Scheren einen weiten, vollständigen Ausschnitt um und unterhalb des Wundbereichs. Nach der Entfernung fixieren Sie das Gewebe gemäß Standardverfahren. Die Hämatoxylin- und Eosin-Färbung kann verwendet werden, um die Wundstruktur und die epitheliale Lücke sichtbar zu machen.Außerdem kann die Neovaskularisierung durch immunhistochemische Analysen zur Bestimmung der Anzahl der Kapillaren beurteilt werden. Eine Wundschlusskurve wird durch Berechnung des durchschnittlichen Wurfdurchmessers ermittelt und die Ergebnisse als Prozentsatz angegeben. In diesem Beispiel beschleunigte die therapeutische Substanz den Wundverschluss im Vergleich zu den Kontrollen erheblich.Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei ordnungsgemäßer Durchführung in 30 Minuten durchgeführt werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die Schiene mit gleichmäßig verteilten Nähten sicher zu befestigen, um die Konsistenz zwischen den Experimenten aufrechtzuerhalten.

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

In diesem Video beschreiben wir ein Verfahren zur Isolierung des koloskopieinduzierten Wundbetts zu einem geeigneten Zeitpunkt für eine detaillierte molekulare Analyse. Diese Analyse hilft, den Wundheilungsprozess bei entzündlichen Erkrankungen des Magen-Darm-Trakts zu verstehen.

Koloskopisch geführtes Maus-Wundmodell: Eine Methode zur Isolierung eines biopsieinduzierten Wundbetts aus dem Dickdarm, um den Heilungsprozess zu verstehen

Wir beschreiben eine nicht-invasive in Vivo imaging-Protokoll, das schlanke und kostengünstige, Verwendung von L-012, eine Chemolumineszenz Luminol-Analog, zu visualisieren und reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzielte eine excisional Wunde Mausmodell zu quantifizieren.

In Vivo Bildgebung von reaktiven Sauerstoffspezies in einem Murine Wunde Modell

Hier stellen wir ein Protokoll für einen In-vitro-Scratch-Assay mit primären Fibroblasten und für einen in vivo Hautwundheilungstest bei Mäusen vor. Beide Assays sind einfache Methoden zur Beurteilung der In-vitro- und In-vivo-Wundheilung.

Scratch Migration Assay und Dorsal Skinfold Kammer für In Vitro und In Vivo Analyse der Wundheilung

Hier werden zwei murine Wundheilungsmodelle beschrieben, eines zur Beurteilung der zellulären und zytokinen Wundheilungsreaktionen und das andere zur Quantifizierung der Rate des Wundverschlusses. Diese Methoden können mit komplexen Krankheitsmodellen wie Diabetes verwendet werden, um Mechanismen verschiedener Aspekte der schlechten Wundheilung zu bestimmen.

Bewertung der akuten Wundheilung mit den dorsalen subkutanen Polyvinylalkoholschwammimplantation und Exzisional Tail Skin Wound Models.

Ziel dieser Studie war es, ein murines Modell der Verbrennungswundung zu entwickeln. Eine thermische Verbrennung wurde auf der rückenden Haut von Mäusen mit einer vorgeheizten Messingschablone induziert. Verbranntes Gewebe wurde entbraut und mit einem Hauttransplantat überzogen, das vom Schwanz einer genetisch ähnlichen Spendermaus geerntet wurde.

Ein murines Modell einer Verbranntenwunde, rekonstruiert mit einem allogenen Hautgraft

Dieses Protokoll beschreibt, wie bilaterale, volldicke Exzisionswunden bei Mäusen erzeugt werden und wie man anschließend die Wunden für die morphometrische Analyse überwacht, erntet und vorbereitet. Enthalten ist eine ausführliche Beschreibung der Verwendung von seriellen histologischen Abschnitten zur Definition, präzisen Quantifizierung und Erkennung morphometrischer Defekte.

Murine Excisional Wound Healing Model und histologische morphometrische Wundanalyse

Hier demonstrieren wir eine optimierte Technik zur Beurteilung der Wundreparatur mit ex vivo menschlicher Haut in Kombination mit einem Whole-Mount-Färbeansatz. Diese Methodik bietet eine präklinische Plattform für die Bewertung potenzieller Wundtherapien.

Humanes Ex-vivo-Wundmodell und Whole-Mount-Färbeansatz zur genauen Bewertung der Hautreparatur

Diese Studie stellt zwei entscheidende experimentelle Techniken vor: die Konstruktion eines murinen Wundmodells zur Beurteilung des Wundverschlusses und die Herstellung von einzelligen Suspensionen aus der Haut von Mäusen, um die zelluläre Lebensfähigkeit zu erhalten.

Maus-Wundmodelle und Herstellung von Einzelzellsuspensionen

Es wird ein optimiertes Protokoll für die Etablierung eines Brandwundenheilungsmodells bei Mäusen mit einem digitalen Heizgerät vorgestellt. Die auf der Haut angelegten schachbrettartigen Experimentierstellen ermöglichen die weitere Funktionsanalyse für den Wundheilungstest.

Schachbrettartiges Brandwundenheilungsmodell von Mäusen basierend auf digitalem Heizgerät

Wunden stellen eine globale gesundheitliche Herausforderung dar. In dieser Studie wurde eine standardisierte Fotokabine mit digitaler Planimetrie entwickelt, um die Variabilität der Wundmessung zu minimieren. Die Überwachung der Wunden bei Mäusen über einen Zeitraum von 14 Tagen zeigte eine anfängliche Zunahme der Wundfläche und des Wundumfangs, gefolgt von einem allmählichen Verschluss. Diese Methodik kann bei der Bewertung der Wundverschlusskinetik in präklinischen Modellen hilfreich sein.

Digitale Planimetrie zur Beurteilung der Wundverschlusskinetik in einem Mausmodell

Ein Rattenhaut-Wundmodell wird beschrieben, das die Bewertung verschiedener therapeutischer Wirkstoffe unter physiologischen oder pathologischen Bedingungen über die verschiedenen Heilungsphasen hinweg ermöglicht. Darüber hinaus wird ein Protokoll zur manuellen Planimetrie zur Überwachung der Wundkontraktionsrate während der gesamten Gewebereparatur detailliert beschrieben.

Ein chirurgisches Ratten-Hautwundmodell: Ein Ansatz für Wundheilungsstudien und Biomaterialbewertung

Erfahren Sie ein murines Wundheilungsmodell mit Silikonschiene zur Verhinderung der Wundkontraktion und Förderung der Epithelialisierung. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Präklinische Tests von Therapeutika.

Mausmodell der Wundheilung

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